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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺動(dòng)脈平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 雞肺動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺動(dòng)脈組織 |
英文名稱 | Chicken Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X7010 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
雞肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞分離自肺動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈亦稱肺動(dòng)脈干,。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中,，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺大動(dòng)脈起于右心室,，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行,，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈,，經(jīng)肺門(mén)入肺,。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動(dòng)脈干,。起自右心室,，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行，至主動(dòng)脈弓下方分為左,、右肺動(dòng)脈,。左肺動(dòng)脈較短，在左主支氣管前方橫行,，分二支進(jìn)入左肺上,、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)而粗,，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行,，至右肺門(mén)處分為三支進(jìn)入右肺上、中,、下葉,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),；成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺動(dòng)脈的正常形態(tài),；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)；組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
Tsu-Pr1細(xì)胞，非雄激素依賴型前列腺癌 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞,KLE細(xì)胞 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHCMEC cDNA | NF-KapB p65 ELISA Kit 大鼠核因子κB亞基p65親和肽 96T |
ROR alpha： 維相關(guān)孤兒受體α抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-H2AX/FITC 熒光素標(biāo)記組蛋白H2AX抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C1orf220： 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框220抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD7 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-C-REL/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞衍生C-型凝集素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
死亡受體4抗體 Anti-DR4/APO2/TRAILR1 0.1ml | Aspartate Aminotransferase： 谷草轉(zhuǎn)酶抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | C57BL/6小鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells |
FBM細(xì)胞，胎兒骨髓間充質(zhì)細(xì)胞 嬰兒雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(拉祜族);KM9406 | U14(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
彈(含10mL酶解緩沖液) 1mL | IL2 Protein Human 重組人 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 |
膽道癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | CL-0020Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人原位胰腺腺癌細(xì)胞 BxPc-3-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in situ pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin | 雞肺動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞C1orf220： 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框220抗體 0.2ml |
大鼠腎小管上皮細(xì)胞RRTEpiC | Hep3B2.1-7細(xì)胞,，人肝癌細(xì)胞 人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞,D341Med細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-24 |
HFT-8810(人胎兒胸腺細(xì)胞株) 5×106cells/瓶×2 奇異變形桿菌 | IL21 Protein Canine 重組狗 IL21 / Ierleukin 21 蛋白 |
CL-0404NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 matrix protein 2 甲型流感病毒M2抗體 規(guī)格 0.2ml | 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞總RNAHUASMC NA |
ETS1 associated protein II： ETS1相關(guān)蛋白2抗體 0.1ml | Anti-Lingo-1 Nogo受體反應(yīng)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
HSP-70(Mouse Heat Shock Protein 70) ELISA Kit 小鼠熱休克蛋白70Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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