大鼠子宮平滑肌原代細胞

大鼠子宮平滑肌細胞分離自子宮組織,；子宮是孕育胎兒的器官,，位于盆腔中部,，膀胱與直腸之間,，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化,。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶,、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持,，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時,，可以引起子宮脫垂。子宮肌層比較厚,，由成束或成片的平滑肌組成,，肌束間以結(jié)締組織分隔。子宮平滑肌具有收縮功能，收縮受激素的調(diào)節(jié),，其收縮活動有助于精子向輸卵管運送,、經(jīng)血排出以及胎兒娩出。子宮平滑肌層含有大量的血管,，如果平滑肌層細胞過度生長,，勢必造成血管壁的增厚，管腔堵塞,，體外培養(yǎng)平滑肌細胞有利于研究子宮和其他富含血管器官的血管形成機制,。子宮平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。子宮平滑肌細胞的主要功能：①子宮平滑肌能保持子宮的基本形態(tài)，在孕期能大化的擴張子宮容積,，保證胎兒孕育環(huán)境；②平滑肌細胞有收縮舒張能力,，在生產(chǎn)時能形成生理性的縮腹環(huán),，推動胎兒向下移動，輔助生產(chǎn),。

產(chǎn)品名稱：大鼠子宮平滑肌細胞

組織來源：子宮組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠子宮平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠子宮平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

大鼠線粒體甘油-3-0酸?；D(zhuǎn)移酶(GPAM)試劑盒 ,，英文名： GPAM ELISA Kit

Pla vitamin K1 (VK1) ELISA Kit 植物K1(VK1)試劑盒

MouseImmunoglobulin,IgAELISAKit 小鼠免疫球蛋白A(IgA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanAlphaLactalbumin,Alpha-LaELISAKit人α乳清蛋白

細胞HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定量PCR擴增試劑盒20次

ELISAKiths-CRP大鼠超敏C反應蛋白

小鼠骨保護素(OPG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human orexin receptor (OXR) ELISA Kit 人食欲素受體(OXR)試劑盒

HumanPancreastatinELISAKit 人胰抑制素(Pancreastatin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-scl70aibody,SCL70/topoⅠ試劑盒人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細胞周期S期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次

Humanypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit人原激活肽(TAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)試劑盒   96T/48T

小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒   96T/48T

小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)試劑盒   96T/48T

小鼠內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒   96T/48T

SERPINB6B重組小鼠 Serpinb6b 蛋白 Protein

白介素12受體β2(IL2Rβ2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 12 Receptor Beta 2 (IL12Rb2)

SAE1重組人 SAE1 蛋白 Protein

DPP10 Protein Human 重組人 DPP10 / DPRP3 蛋白

TNFSF4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 蛋白 (Fc 標簽)

HA Others H5N2 甲型流感 H5N2 (A/osich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液   CRELD2 Others Mouse 小鼠 CRELD2 人細胞裂解液   JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系 小鼠原代腹腔主動脈內(nèi)皮細胞 小鼠原代視網(wǎng)膜muller細胞

大鼠子宮平滑肌原代細胞Isulin 胰島素(抗原 0.5mgIsulin 胰島素(抗原)

CD58 Protein Human 重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 (Fc 標簽)

FGFR4重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

NAALADL1 Protein Mouse 重組小鼠 NAALADL1 蛋白

FAM3D重組人 FAM3D 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。