大鼠椎間盤纖維環(huán)原代細胞

大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織,；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板,、纖維環(huán),、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板,，是透明軟骨復蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來,。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,，使纖維環(huán)成為堅實的組織,，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚,，而后側(cè)較薄,。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄,、較薄,。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型,，主要屬于纖維細胞,，內(nèi)層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞,。在培養(yǎng)的情況下,，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓,，核仁較明顯,。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多,，為橢圓形,，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體,。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒,，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給,。一但這種供給減少,，纖維環(huán)的生物性能就會減弱,，椎間盤開始退變。

產(chǎn)品名稱：大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞

組織來源：椎間盤組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

大鼠血管非性蛋白1(VNN1)試劑盒 ,，英文名： VNN1 ELISA Kit

Plas of 25 hydroxy vitamin D3 (25 (OH) ELISA kit D3/25 HVD3) ELISA kit E 植物25羥基3(25(OH)試劑盒D3/25 HVD3)試劑盒E

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CLIAKitforHumanapelin12,AP12ELISAKit人apelin12

細胞ERK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

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Humanai-rubellavirusIgMaibody,ai-RVIgM試劑盒人抗風疹病毒IgM抗體(ai-RVIgM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細胞周期G1早期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次

HumauberculosisaibodyIgG，TB-AbIgGELISAKit人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-AbIgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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PDCD1重組人 PD1 / PDCD1 蛋白 Protein

尾加壓素2(UST2)重組蛋白 Recombinant Urotensin 2 (UST2)

RAET1E重組人 RAET1E / ULBP4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD55 Protein Human 重組人 CD55 / DAF 蛋白

HA Protein H1N3 重組甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

Gibco 17104019 Collagenase Type IV 1g  PRC1 Others Human 人 PRC1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   INHBB Others Human 人 Activin B 人細胞裂解液   IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 小鼠原代膈肌細胞 大鼠原代卵巢表面上皮細胞

大鼠椎間盤纖維環(huán)原代細胞NKG2A/CD159a/KLRC1 NK細胞受體2A/自然殺傷細胞活化性受體2A抗原 0.5mgNKG2A/CD159a/KLRC1 NK細胞受體2A/自然殺傷細胞活化性受體2A抗原

ICAM4 Protein Human 重組人 ICAM4 / CD242 蛋白 (Fc 標簽)

IL1B重組兔 IL-1 beta / IL1B 蛋白 Protein

REG3B Protein Mouse 重組小鼠 REG3B / Pap1 蛋白

FOLR1重組人 FOLR1 / Folate receptor alpha 蛋白 Protein