大鼠直腸黏膜上皮原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代心臟微血管周細胞 hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞) HB611 人肝癌細胞 1ml/T75 M1 小鼠白血病細胞 RF/6A 135 猴脈絡膜-視網(wǎng)膜（內(nèi)皮）細胞 雞原代外周血單核細胞

大鼠直腸黏膜上皮原代細胞

大鼠直腸黏膜上皮細胞分離自直腸組織,；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi),。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結腸,，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈,，下端以門而終,。直腸上端的大小似結腸，其下端擴大成直腸壺腹,，是糞便排出前的暫存部位,，下端變細接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關系密切,，與骶椎有相同的曲度,。直腸周圍多脂肪,、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側,。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障,，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此,，腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用,。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,，在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發(fā)生,、性質(zhì)和強度。

產(chǎn)品名稱：大鼠直腸黏膜上皮細胞

組織來源：直腸

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

大鼠直腸黏膜上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的大鼠直腸黏膜上皮采用先機械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

大鼠血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)試劑盒 ,，英文名： PROCR ELISA Kit

Mouse hydroxyproline (Hyp) ELISA Kit 小鼠羥脯(Hyp)試劑盒

Mousemaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanBetaLactoglobulin,Beta-LgELISAKit人β乳球蛋白

細胞D-葡萄糖氧化法定量試劑盒20次

ELISAKitFⅧAg大鼠第八因子相關抗原

小鼠Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cyclin D2 (Cyclin-D2) ELISA Kit 大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)試劑盒

HumanHydrocoisone,HYDELISAKit 人輕化1(HYD)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanComplemefragme5b,C5b試劑盒人補體片斷5b(C5b)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CDK3/CYCLINE激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit人蛋白酶3特異性抗粒細胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔子膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒   96T/48T

兔子前列腺素E2(PGE2)試劑盒   96T/48T

兔子前列腺素E1(PGE1)試劑盒   96T/48T

兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒   96T/48T

EFNA1重組小鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2 0.5mgASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原

NEIL1重組人 NEIL1 蛋白 Protein

CD63 Protein Human 重組人 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

THY1 Protein Rat 重組大鼠 CD90 / THY-1 蛋白

GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液   人胚腎細胞;293 [HEK-293] GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 Rattus  rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細胞-骨髓  中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS3 小鼠原代骨骼肌成纖維細胞 大鼠原代α-SMA陽性腎周肌成纖維細胞

大鼠直腸黏膜上皮原代細胞腎素(REN)重組蛋白 Recombinant Renin (REN)

CTHRC1 Protein Human 重組人 CTHRC1 蛋白

HSPB1重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MAPK14重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。