詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠支氣管成纖維采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠支氣管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠支氣管成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 支氣管組織 |
英文名稱 | Rat Bronchial Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7037 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠支氣管成纖維細(xì)胞分離自支氣管組織,;支氣管(Bronchi),,是指由氣管分出的各級(jí)分枝,由氣管分出的一級(jí)支氣管,,即左,、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,,前者較細(xì)長(zhǎng),,走向傾斜;后者較粗短,,走向較前者略直,,所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是,,氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架,而支氣管不是,。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),,在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的支氣管成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長(zhǎng),,不聚集成團(tuán),;細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦,、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細(xì)胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。支氣管成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括:構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài),,合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
大鼠血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)試劑盒 ,,英文名: ANGPTL4 ELISA Kit
Mouse prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 小鼠前列腺素E1(PGE1)試劑盒
Mouseangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanCalreticulin,CELISAKit人鈣網(wǎng)蛋白
細(xì)胞CSK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitTE大鼠端粒酶
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat growth factor (GH) ELISA Kit 大鼠生長(zhǎng)因子(GH)試劑盒
HumanpreptinELISAKit 人preptin試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanchaperonin10,CPN10試劑盒人伴侶蛋白10(CPN10)試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系基因定性試劑盒20次
humanserine/cysteinepeptidaseinhibitorcladeAmember3G,Serpina3gELISAKit人絲蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISAKit ELISA. 96T/48T
TACSTD2重組人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)重組蛋白 Recombinant Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)
GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein
CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白
Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標(biāo)簽)
FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人細(xì)胞裂解液 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-胎兒HEK-f CM-R038大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞原代單核細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml C6 大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞 小鼠原代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞 人原代食管上皮細(xì)胞
大鼠支氣管成纖維原代細(xì)胞fgL2 (Fibrinogen-like 2 0.5mgfgL2 (Fibrinogen-like 2) 原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)
DEFB103A Protein Human 重組人 Defensin / Beta-defensin 3 / DEFB103 蛋白
IFNA5重組大鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 Protein
EPHA2 Protein Mouse 重組小鼠 EphA2 蛋白
PIN1重組人 PIN1 / Rotamase Pin1 蛋白 Protein
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),,PBS沖洗3次,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。