詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠支氣管成纖維采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
公司實驗室分離的大鼠支氣管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠支氣管成纖維原代細胞 | 組織來源 | 支氣管組織 |
英文名稱 | Rat Bronchial Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7037 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
大鼠支氣管成纖維細胞分離自支氣管組織,;支氣管(Bronchi),,是指由氣管分出的各級分枝,由氣管分出的一級支氣管,,即左、右主支氣管,。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細長,,走向傾斜;后者較粗短,,走向較前者略直,,所以經(jīng)氣管墮入的異物多進入右主支氣管,。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是,氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架,,而支氣管不是,。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,,在一定條件下,,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的支氣管成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長,,不聚集成團,;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,,細胞質透明,細胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。支氣管成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持組織的正常形態(tài),,合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞培養(yǎng)方法:
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品:
大鼠血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)試劑盒 ,,英文名: ANGPTL4 ELISA Kit
Mouse prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 小鼠前列腺素E1(PGE1)試劑盒
Mouseangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 小鼠血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanCalreticulin,CELISAKit人鈣網(wǎng)蛋白
細胞CSK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitTE大鼠端粒酶
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat growth factor (GH) ELISA Kit 大鼠生長因子(GH)試劑盒
HumanpreptinELISAKit 人preptin試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanchaperonin10,CPN10試劑盒人伴侶蛋白10(CPN10)試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉基因玉米MON863品系基因定性試劑盒20次
humanserine/cysteinepeptidaseinhibitorcladeAmember3G,Serpina3gELISAKit人絲蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G(Serpina3g)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠胚胎干細胞系MESPU30(M30)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISAKit ELISA. 96T/48T
TACSTD2重組人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
性激素結合球蛋白(SHBG)重組蛋白 Recombinant Sex Hormone Binding Globulin (SHBG)
GH1重組人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白 Protein
CD69 Protein Human 重組人 CD69 蛋白
Spike Protein SARS 重組SARS Spike 蛋白 (Receptor Binding Domain, His 標簽)
FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人細胞裂解液 人表皮角質細胞-胎兒HEK-f CM-R038大鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞原代單核細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml C6 大鼠膠質瘤細胞 小鼠原代骨髓基質干細胞 人原代食管上皮細胞
大鼠支氣管成纖維原代細胞fgL2 (Fibrinogen-like 2 0.5mgfgL2 (Fibrinogen-like 2) 原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)
DEFB103A Protein Human 重組人 Defensin / Beta-defensin 3 / DEFB103 蛋白
IFNA5重組大鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 Protein
EPHA2 Protein Mouse 重組小鼠 EphA2 蛋白
PIN1重組人 PIN1 / Rotamase Pin1 蛋白 Protein
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。