大鼠胰島原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代食管上皮細(xì)胞 Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞) Daudi 人Butt淋巴瘤細(xì)胞 1ml/T75 4T1 小鼠癌細(xì)胞 COS-1 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的細(xì)胞 人原代肝星狀細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠胰島采用膠原酶灌注消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠胰島經(jīng)DTZ染色檢測,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠胰島細(xì)胞分離自胰腺組織,；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液,，腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有、原,、脂肪酶,、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞,、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素,，降低血糖,；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌,；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動,、胰液分泌和膽囊收縮,。胰島細(xì)胞作為糖尿病新藥的細(xì)胞篩選模型需保持其結(jié)構(gòu)完整、生理功能穩(wěn)定和足夠長的存活時間,。胰島占胰腺總質(zhì)量的1%-2%,，每個胰島大概含有1000個細(xì)胞。胰島移植可消除常規(guī)治療產(chǎn)生的嚴(yán)重低血糖癥狀,，具有創(chuàng)傷小及并發(fā)癥少等優(yōu)點,，是有前景的Ⅰ型糖尿病治療方案。移植胰島的獲得需經(jīng)過供體篩選,、胰腺消化,、胰島分離純化及結(jié)果鑒定等步驟，分離純化效果取決于原料及操作方法的選擇,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。