大鼠眼動脈內(nèi)皮原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腎動脈內(nèi)皮細胞 Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細胞) IM-9 人外周血B淋巴細胞 1ml/T75 P19 小鼠畸胎瘤細胞 RAMSCs 大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞 人原代骨髓樹突狀細胞(DC細胞)

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細胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的大鼠眼動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠眼動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

 

細胞簡介：

大鼠眼動脈內(nèi)皮細胞分離自眼動脈組織，眼動脈是眼眶及內(nèi)容物主要的血液供應(yīng)，是頸內(nèi)動脈主要分枝,，也是交通顱內(nèi)外血管的重要通道,。有研究結(jié)果認為，絕大多數(shù)眼動脈起源于ICA剛出海綿竇處,，且多數(shù)起源于ICA床突上段內(nèi)上壁,，少數(shù)起源于上壁，少數(shù)眼動脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動脈,。眼動脈的走行分為顱內(nèi)段,、管內(nèi)段及眶內(nèi)段，眼動脈在管內(nèi)段一般行走于視上方,，顱內(nèi)段和眶內(nèi)段再分為五段：1,、短臂；2,、A角,；3、長臂,；4,、B角；5,、遠側(cè)部,。眼動脈進入眶內(nèi)后沿視向下外側(cè)走行，終止于眶孔的上內(nèi)側(cè)角,。眼動脈的分枝一般分為眼組,、眶組及眶外組。眼組分為視網(wǎng)膜中央動脈睫前動脈及眼球的脈絡(luò)叢,；眶組分為淚腺動脈和肌動脈,；眶外組分為篩后動脈、篩前動脈,、眶上動脈,、瞼內(nèi)側(cè)動脈、鼻背動脈(終末枝),。眼動脈內(nèi)皮細胞是覆蓋在眼動脈內(nèi)面的單層細胞,，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些血管疾病的發(fā)生,。因此,，眼動脈內(nèi)皮細胞已成為研究眼部血管疾病發(fā)病機制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細胞,，由一層扁平細胞所組成,。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口,。內(nèi)皮細胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng),，由心臟直至小的微血管。眼動脈供應(yīng)整個眼球,、眼球附屬器及部分附近組織的營養(yǎng),。眼動脈可發(fā)生痙攣、血栓,、栓塞及出血等,，均可嚴重影響視力。頸內(nèi)動脈眼動脈瘤簡稱眼動脈瘤,，又稱床突旁動脈瘤或頸內(nèi)動脈腹側(cè)動脈瘤,。眼動脈瘤是位于眼動脈和后交通動脈之間的動脈瘤，占全部顱內(nèi)動脈瘤的0.47%～9.26%,，30%～70%患者表現(xiàn)為SAH,，1/3有視功能損傷,，如視力減退、視野缺損和視等。體外培養(yǎng)的眼動脈內(nèi)皮細胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、EGF,、bFGF,、IGF、VEGF,、Heparin,、Hydrocortisone、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠眼動脈內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。