大鼠雪旺氏原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代皮層元細胞 293E(人胚細胞（EBNA1基因修飾）) RPMI-8226/IL21 人多發(fā)性骨髓瘤細胞（白介素21基因修飾） 1ml/T75 L1210 小鼠白血病細胞 REM 大鼠胚胎肌肉成纖維樣細胞 人原代結腸癌組織源細胞

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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠雪旺氏采用-膠原酶混合消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠雪旺氏經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

 

細胞簡介：

大鼠雪旺氏細胞分離組織,；周圍系統(tǒng)中的膠質細胞稱施萬（schwann，又名雪旺細胞）細胞,，它沿元的突起分布,。施萬細胞包裹在纖維上，這種纖維叫有髓纖維,。有髓纖維和無髓纖維的施萬細胞的形態(tài)和功能有所差異,，施萬細胞的外表面有基膜，能分泌營養(yǎng)因子,，促進受損的元的存活及其軸突的再生,，參與周圍系統(tǒng)中纖維的構成,。施萬細胞的胞核呈長卵圓形，其長軸與軸突平行,，核周有少量胞質,。由于施萬細胞包在軸突的外面，故又稱膜細胞（neurilemmalcell）,，它的外面包有一層基膜,。施萬細胞外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱膜（neurilemma），光鏡下可見此膜,。在有髓纖維發(fā)生中,，伴隨軸突一起生長的施萬細胞表面凹陷成一縱溝,，軸突位于縱溝內,，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長并反復包卷軸突,，把胞質擠至細胞的內,、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層,，即為髓鞘,。故髓鞘乃成自施萬細胞的胞膜，屬施萬細胞的一部分,。施萬細胞的胞質除見于細胞的外,、內邊緣和兩端外，還見于髓鞘板層內的施－蘭切跡,。該切跡構成螺旋形的胞質通道,，并與細胞外、內邊緣的胞質相通,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 雙極,、多極形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側,，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：