大鼠胸腺上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腦微血管周細(xì)胞 TE-13(人食管癌細(xì)胞) MUM-2C 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 1ml/T75 EMT-6 小鼠癌 NR8383 大鼠肺泡巨噬細(xì)胞 人原代卵巢成纖維細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胸腺上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胸腺上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠胸腺上皮細(xì)胞分離自胸腺組織；胸腺是機(jī)體重要的淋巴器官,，其功能與免疫緊密相關(guān),，是T細(xì)胞分化、發(fā)育,、成熟的場所,，還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具有內(nèi)分泌技能的器官,。胸腺上皮細(xì)胞和胸腺細(xì)胞是胸腺微環(huán)境的重要組成部分,，其外，胸腺上皮細(xì)胞組成了胸腺細(xì)胞不同發(fā)育階段的三維結(jié)構(gòu),，根據(jù)其在胸腺中位置不同,，可分為皮質(zhì)胸腺上皮細(xì)胞和髓質(zhì)胸腺上皮細(xì)胞,。胸腺細(xì)胞的發(fā)育和成熟是通過在胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)上皮細(xì)胞的遷移過程中相互作用完成的。此外,，胸腺細(xì)胞通過皮質(zhì)胸腺上皮細(xì)胞介導(dǎo)的陽性選擇和髓質(zhì)胸腺上皮細(xì)胞介導(dǎo)的陰性選擇發(fā)育為能夠識別和耐受自身主要組織相容復(fù)合體和自身抗原的成熟T淋巴細(xì)胞,。胸腺上皮細(xì)胞是構(gòu)成胸腺微環(huán)境的主要成份，其形態(tài),、分布和功能多樣,。表面抗原表達(dá)具有高度異質(zhì)性，與胸腺細(xì)胞結(jié)合成不同類型復(fù)合體,，部分胸腺上皮細(xì)胞相互排列構(gòu)成囊泡樣結(jié)構(gòu),。電鏡觀察，可把胸腺上皮細(xì)胞分為3-6型,，用抗胸腺上皮細(xì)胞單克隆抗體熒光染色可把胸腺上皮細(xì)胞分為9種類型,。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：