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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴采用機械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為1×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴經(jīng)過檢測,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

細胞簡介：

大鼠胸腺淋巴細胞分離自胸腺組織；胸腺是機體的重要淋巴器官,，其功能與免疫緊密相關(guān),，是T細胞分化、發(fā)育,、成熟的場所,。其還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機能的器官,。位于胸腔前縱隔,。胚胎后期及初生時，是一生中重量相對大的時期,。隨年齡增長,，胸腺繼續(xù)發(fā)育,；此后胸腺逐漸退化,，淋巴細胞減少，脂肪組織增多,。胸腺的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜,，結(jié)締組織伸入胸腺實質(zhì)把胸腺分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì),，深部為髓質(zhì),。皮質(zhì)不包圍髓質(zhì)，相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接,。皮質(zhì)主要由淋巴細胞和上皮性網(wǎng)狀細胞構(gòu)成,，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細胞間有密集的淋巴細胞,。胸腺的淋巴細胞又稱為胸腺細胞,，在皮質(zhì)淺層細胞較大，為較原始的淋巴細胞,。中層為中等大小的淋巴細胞,，深層為小淋巴細胞。從淺層到深層為造血干細胞增殖分化為小淋巴細胞的過程,。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細胞,，無淋巴小結(jié),。髓質(zhì)中淋巴細胞少而稀疏，上皮性網(wǎng)狀細胞多而顯著,。形態(tài)多樣,，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)，為其分泌物,，尚有散在的圓形的胸腺小體,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。