大鼠心肌原代細胞

大鼠心肌細胞分離自心臟組織,；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官,，主要功能是為血液流動提供壓力,，把血液運行至身體各個部分,。心臟由心肌構成，左心房,、左心室,、右心房、右心室四個腔組成,。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣）,，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動,，向器官,、組織提供充足的血流量，以供應氧和各種營養(yǎng)物質,，并帶走代謝的終產物（如二氧化碳、無機鹽,、尿素和尿酸等）,，使細胞維持正常的代謝和功能。心肌細胞呈菱形,、多邊形等不規(guī)則形狀,；細胞培養(yǎng)2h后開始貼壁，呈梭形；到12h左右,，細胞開始伸出偽足,，呈菱形、多角形,；細胞分離培養(yǎng)48h以后,，大部分伸出偽足、呈巴掌狀,，部分心肌細胞會出現(xiàn)搏動,；心肌細胞為終末分化細胞，在體外不增殖,。體外培養(yǎng)的心肌細胞可保持結構及功能上的某些特點,，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動，且心肌細胞的培養(yǎng)具有簡便,、定量,、重復性好以及不受體液因素的影響等特點。利用培養(yǎng)的心肌細胞在探索非血液動力學因素所致的心肌肥厚的調節(jié),，研究心肌細胞的生物力學,、凋亡、受體下調,、缺血預處理,、信號通路、對作用于心臟的新藥進行篩選并對其安全性進行評價以及從培養(yǎng)的心肌細胞中提取有價值的生物因子等方面具有廣闊的應用前景,，對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

產品名稱：大鼠心肌細胞

組織來源：心臟組織

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠心肌采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法,，并用化學試劑抑制法篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠心肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

大鼠原激活蛋白激酶10(MAPK10)試劑盒 ,，英文名： MAPK10 ELISA Kit

Mouse omein ELISA Kit (omein) 小鼠網(wǎng)膜素(omein)試劑盒

Ratesogen,EELISAKit 大鼠雌激素(E)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHGV-IgM(HumanHepatitisGvirusIgG)ELISAKit人庚型肝病毒IgM

細胞SGK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPCⅠ大鼠Ⅰ型前膠原

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat follistatin (FS) ELISA Kit 大鼠卵泡抑素(FS)試劑盒

humahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-nucleolusaibody,ANA試劑盒人抗核仁抗體(ANA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物糖類總量鐵比色法定量試劑盒20次

humanUDP-glucoseceramideglucosylansferaseELISAKit人尿苷二0酸葡萄糖酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

(Fibrinogen)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

人 Foxp3(Foxp3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

半乳糖凝集素 7 （ Galectin-7 ）   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

胃泌素 (Gasin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

KIT重組大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 Protein

FGF4/HSTF1/HBGF-4(Fibroblast Growth Factor4 0.5mgFGF4/HSTF1/HBGF-4(Fibroblast Growth Factor4) 纖維母細胞生長因子4抗原

TLK1重組人 TLK1 / PKU-beta 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

FGFR2 Protein Human 重組人 FGFR2 / CD332 蛋白 (aa 400-821, His & GST 標簽)

EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

EFNA5 Protein Canine 重組狗 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)  EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0910  人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16  小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1 大鼠脈絡膜血管細胞 人腸平滑肌細胞 小鼠原代晶狀體上皮細胞 大鼠原代頜下腺上皮細胞

大鼠心肌原代細胞Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3 0.5mgSocs 3 (suppressor of cytokine signaling 3) 細胞因子信號傳導抑制蛋白3抗原

CPVL Protein Human 重組人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白

PPIL2重組人 PPIL2 蛋白 (aa 280-457, His 標簽) Protein

PDGFC Protein Human 重組人 PDGF-C 蛋白 (Fc 標簽)

B4GALT1重組人 B4GALT1 / GGTB2 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。