大鼠小腸Cajal間質(zhì)原代細胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代呼吸道上皮細胞 M14(人黑色素瘤細胞) HEC-1-A 人內(nèi)膜腺癌細胞 1ml/T75 VERO 非洲綠猴細胞 BABL/C2 BABL/C小鼠胚胎細胞 人原代臍帶血間充質(zhì)干細胞

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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠小腸Cajal間質(zhì)采用膠原酶消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠小腸Cajal間質(zhì)經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

 

細胞簡介：

大鼠小腸Cajal間質(zhì)細胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所,。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸,，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程,，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜、粘膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞,、潘氏細胞和未分化細胞,。柱狀細胞和內(nèi)分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似,，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣。Cajal間質(zhì)細胞（ICC）是一類主要分布于胃腸道的間質(zhì)細胞,，是胃腸道的起搏細胞和信號傳導(dǎo)細胞,，與肌細胞以及末梢元有著緊密的關(guān)系，具有激發(fā)和促進胃腸蠕動的作用,。借助于電子顯微鏡技術(shù),，清楚觀察到了ICC位置分布和內(nèi)部精細結(jié)構(gòu)；應(yīng)用免疫熒光等生化技術(shù),，發(fā)現(xiàn)了其特殊表達的c-kit蛋白,；利用電生理技術(shù)，得知多種胃腸動力障礙疾病也與其異常有關(guān),。多年來,，學(xué)者逐漸在胃腸道、膽道,、膀胱,、子宮等部位發(fā)現(xiàn)了ICC的蹤跡,，并試圖闡述其與某些疾病的發(fā)生機制。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：

大鼠早老素1(PSEN1)試劑盒 ，英文名： PSEN1 ELISA Kit

Mouse lymphocyte chemotactic factor (Lptn/LTN/XCL1) ELISA Kit 小鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)試劑盒

MouseIerleukin3,IL-3ELISAKIT 小鼠白介素3(IL-3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit人胃腸癌標志物CA199

細胞/組織mRNA直接化試劑盒10次

ELISAKitTIMP-4大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4

小鼠0酸化基末端蛋白激酶(P-JNK)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostaglandin D syhase (PGDS) ELISA Kit 人前列腺素D合成酶(PGDS)試劑盒

HumanBcl-2associatedXprotein,BaxELISAKit 人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAdenovirusIgM,ADV-IgM試劑盒人腺病毒IgM(ADV-IgM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物3-0酸甘油脫氫酶(GAPDH)活性酶動力比色法定量試劑盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin1,AFP-L1ELISAKit小鼠小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠堿性0酸酶   英文名稱：   Mouse Alkaline phosphatase   規(guī)格：      英文縮寫：   ALP

小鼠同種異體移植性因子1   英文名稱：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   規(guī)格：      英文縮寫：   AIF-1

小鼠血管生成素樣蛋白2   英文名稱：   Mouse Angiopoietin like protein 2   規(guī)格：      英文縮寫：   ANGPTL2

小鼠血管生成素樣蛋白4   英文名稱：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   規(guī)格：      英文縮寫：   ANGPTL4

CPB1重組小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 Protein

CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha 0.5mgCaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原

TP63重組人 P63 / TP63 / Tumor protein p63 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

F9 Protein Human 重組人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白

SLAMF1 Protein Rat 重組大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 蛋白

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMYF 人關(guān)節(jié)軟骨細胞 SLPI Others Human 人 SLPI 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   ICOS Others Human 人 ICOS / AILIM / CD278 人細胞裂解液   WI-38(人胚肺細胞) 小鼠原代卵巢表面上皮細胞 大鼠原代腸道干細胞

大鼠小腸Cajal間質(zhì)原代細胞雌激素受體β(ERβ)重組蛋白 Recombinant Estrogen Receptor Beta (ERb)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標簽)

FCGRT & B2M重組小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

CXCL9 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

EPHA2重組人 EphA2 蛋白 (His 標簽) Protein