大鼠外周血中性粒原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 EJ(人膀胱癌細(xì)胞) PA-1 人畸形瘤細(xì)胞 1ml/T75 NRL2 黑化大家鼠肺成纖維樣細(xì)胞 Dami 人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 人原代乳腺癌成纖維細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血粒采用取外周血,、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血粒經(jīng)瑞氏染色法,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠外周血粒細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。白細(xì)胞是一類無色、球形,、有核的血細(xì)胞,。白細(xì)胞不是一個均一的細(xì)胞群，根據(jù)其形態(tài),、功能和來源部位可以分為三大類：粒細(xì)胞,、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，其中粒細(xì)胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同,，分為粒細(xì)胞,、嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞三種。粒細(xì)胞是在瑞氏（Wright）染色血涂片中,，胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色,，有許多彌散分布的細(xì)小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀,，葉與葉間有細(xì)絲相連,。粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用,。粒細(xì)胞來源于骨髓,，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的細(xì)顆粒,。這些顆粒多是溶酶體,，內(nèi)含髓過氧化酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類,，與細(xì)胞的吞噬和消化功能有關(guān),。粒細(xì)胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機(jī)體抵御微生物病原體,，特別是在化膿性細(xì)菌入侵的第一線,，具有很強(qiáng)的吞噬活性，可吞噬細(xì)菌,、衰老的紅細(xì)胞,、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細(xì)胞等。粒細(xì)胞內(nèi)含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和組織碎片分解,。當(dāng)粒細(xì)胞吞噬數(shù)十個細(xì)菌后,，自身發(fā)生解體，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液,。粒細(xì)胞是人體內(nèi)壽命短的細(xì)胞,，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定,，48h活性下降,，96h基本死亡。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：