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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的大鼠外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的大鼠外周血樹突狀經CD86免疫熒光鑒定,、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產品名稱 | 大鼠外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Rat Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8266 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠外周血DC細胞分離自外周血,，由外周血單核細胞誘導而成的,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突,，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導成的單核細胞,，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成,，多數(shù)呈懸浮生長,， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大,，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟,。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志,、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答,，處于啟動,、調控,、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化,、增殖產生免疫應答，不能激活T細胞的第二信號,，可導致T細胞無能,，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形,、梭形、多角形,，形態(tài)多樣
傳代特性：屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
大鼠外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。
公司產品：
大鼠脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2)試劑盒 ,，英文名： ADIPOR2 ELISA Kit
Mouse soluble iercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) ELISA Kit 小鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒
MouseGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit 小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanhiston-H2bELISAKit人組蛋白H2b
B3比色法定量試劑盒20次
ELISAKitCollagenaseII大鼠膠原酶II
小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat iact parathormone (i-PTH) ELISA Kit 大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒
Humanproteiyrosinekinase,PTKELISAKit 人蛋白酪激酶(PTK/CD115)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanBromodeoxyuridine,BrdU試劑盒人溴脫氧核苷尿(BrdU)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒20次
HumanSomatostatin，SSELISAKit人(SS)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒 小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠0酸化蛋白激酶試劑盒,、小鼠0酸化蛋白激酶eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月,。
小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產品別名：小鼠抗核膜糖蛋白210抗體試劑盒、小鼠抗核膜糖蛋白210抗體eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月,。
小鼠基質金屬蛋白酶試劑盒 小鼠基質金屬蛋白酶試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 小鼠基質金屬蛋白酶試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝）,，產品別名：小鼠基質金屬蛋白酶試劑盒,、小鼠基質金屬蛋白酶eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月。
小鼠肺表面活性物質相關蛋白試劑盒 小鼠肺表面活性物質相關蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 小鼠肺表面活性物質相關蛋白試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠肺表面活性物質相關蛋白試劑盒,、小鼠肺表面活性物質相關蛋白eisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質期：6個月,。
IL1R1重組食蟹猴 IL1R1 蛋白 Protein
Integrin Alpha3 整合素α3抗原 0.5mgIntegrin Alpha3 整合素α3抗原
EPHA4重組人 EphA4 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
DARS Protein Human 重組人 DARS 蛋白
SERPINI1 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白
DLL1 Others Rat 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細胞裂解液 ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人細胞裂解液 CM-M017小鼠胰腺導管上皮細胞原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑Many 小鼠原代腦動脈平滑肌細胞 小鼠原代牙齦成纖維細胞
大鼠外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞)CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)
CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 標簽)
PDGFRA重組大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein
SERPINA11 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA11 蛋白
CCL21重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側,，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,，以免產生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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