大鼠外周血樹突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代肝實質(zhì)細(xì)胞 D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) Caov-3 人癌細(xì)胞 1ml/T75 NRK-49F 大鼠正常成纖維細(xì)胞 MOLT-4 人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 人原代乳腺癌組織源細(xì)胞

大鼠外周血樹突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)

大鼠外周血DC細(xì)胞分離自外周血，由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的,；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞,，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突,，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長,， 細(xì)胞呈圓形,，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞,。未成熟DC細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,，主要通過形態(tài)學(xué),、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定,。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,，處于啟動、調(diào)控,、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化,、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,，不能激活T細(xì)胞的第二信號，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能,，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,，一般在30%以下。

產(chǎn)品名稱：大鼠外周血樹突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)

組織來源：外周血

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形,，樹突狀

傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

大鼠外周血樹突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠外周血樹突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達(dá)80%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

大鼠脂素1(LPIN1)試劑盒 ，英文名： LPIN1 ELISA Kit

Mouse soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanHMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1ELISAKit

B2高效液相色譜法定量試劑盒20次

ELISAKitGDNF大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的營養(yǎng)因子

小鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat maix metalloproteinase 9/ gelatinase B (MMP-9/G 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/G

Humandeoxyribonucleicproteinaibody,DNP-AbELISAKit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Hamstermaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAK倉鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子-1   英文名稱：   Soluble Iercellular Adhesion Molecule-1   規(guī)格：      英文縮寫：   sICAM-1

小鼠干擾素-α   英文名稱：   Ierferon α   規(guī)格：      英文縮寫：   IFN-α

小鼠干擾素-β   英文名稱：   Ierferon β   規(guī)格：      英文縮寫：   IFN-β

小鼠干擾素-γ   英文名稱：   Ierferon γ   規(guī)格：      英文縮寫：   IFN-γ

CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD72分子(CD72)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 72 (CD72)

AZGP1重組人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CST3 Protein Rat 重組大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白

DLD-1細(xì)胞,，人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤,Y79細(xì)胞 人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30  SELPLG Others Mouse 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人細(xì)胞裂解液   rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞 A4細(xì)胞 HL-7702(肝細(xì)胞) 小鼠原代腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 大鼠原代腎臟巨噬細(xì)胞

大鼠外周血樹突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白

EGF重組狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein

FSTL1 Protein Mouse 重組小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IFNG重組人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。