詳細(xì)介紹
大鼠外周血樹(shù)突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)
大鼠外周血DC細(xì)胞分離自外周血,,由外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;外周血是除骨髓之外的血液,,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,,在二十一世紀(jì)初人類開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。樹(shù)突狀細(xì)胞分為成熟樹(shù)突狀細(xì)胞和未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞呈半貼壁生長(zhǎng),,在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,,亦可見(jiàn)少量短刺狀突,,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見(jiàn)吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導(dǎo)而成,,多數(shù)呈懸浮生長(zhǎng), 細(xì)胞呈圓形,,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,,表面大量粗細(xì)不等的樹(shù)枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞,。未成熟DC細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟,。DC細(xì)胞尚無(wú)特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,,主要通過(guò)形態(tài)學(xué),、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志,、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,,處于啟動(dòng)、調(diào)控,、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),;未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化,、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,,不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào),可導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能,,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD80、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,,一般在30%以下。
英文名稱 | Rat Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells | 組織來(lái)源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8265 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形,,樹(shù)突狀 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:大鼠外周血樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)
組織來(lái)源:外周血
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形,,樹(shù)突狀
傳代特性:屬于高度分化細(xì)胞,;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
大鼠外周血樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血樹(shù)突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定,,純度可達(dá)80%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
大鼠脂素1(LPIN1)試劑盒 ,,英文名: LPIN1 ELISA Kit
Mouse soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒
MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforhumanHMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1ELISAKit
B2高效液相色譜法定量試劑盒20次
ELISAKitGDNF大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)因子
小鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat maix metalloproteinase 9/ gelatinase B (MMP-9/G 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/G
Humandeoxyribonucleicproteinaibody,DNP-AbELISAKit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Hamstermaixmetalloproteinase9/GelatinaseB,MMP-9ELISAK倉(cāng)鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次
MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子-1 英文名稱: Soluble Iercellular Adhesion Molecule-1 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): sICAM-1
小鼠干擾素-α 英文名稱: Ierferon α 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): IFN-α
小鼠干擾素-β 英文名稱: Ierferon β 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): IFN-β
小鼠干擾素-γ 英文名稱: Ierferon γ 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): IFN-γ
CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CD72分子(CD72)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 72 (CD72)
AZGP1重組人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 Protein
DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CST3 Protein Rat 重組大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白
DLD-1細(xì)胞,人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤,Y79細(xì)胞 人導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30 SELPLG Others Mouse 小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 人細(xì)胞裂解液 rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞 A4細(xì)胞 HL-7702(肝細(xì)胞) 小鼠原代腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 大鼠原代腎臟巨噬細(xì)胞
大鼠外周血樹(shù)突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原
CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白
EGF重組狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein
FSTL1 Protein Mouse 重組小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
IFNG重組人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。