大鼠外周血單核原代細胞

大鼠外周血單核細胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細胞,，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞,，并在骨髓中發(fā)育。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞,。與其他血細胞比較,，單核細胞內含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強的吞噬作用,。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,，細胞體積繼續(xù)增大，直徑可達50-80μm,，細胞內所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多,，成為成熟的細胞。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞,，它們經常大量存在于淋巴結,、肺泡壁、骨髓,、肝和脾等器官,。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒、干擾素和白細胞介素,，參與機體防衛(wèi)機制,，還產生一些能促進內皮細胞和平滑肌細胞生長的因子。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂,，并包圍異物,。

產品名稱：大鼠外周血單核細胞

組織來源：外周血

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼壁半懸浮

細胞形態(tài) 圓形、巨噬細胞樣

傳代特性 不增殖,；不傳代

消化液 0.25%

方法簡介

普諾賽實驗室分離的大鼠外周血單核采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

普諾賽實驗室分離的大鼠外周血單核經CD14免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

大鼠中期因子(MK)試劑盒 ，英文名： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)試劑盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1熒光定量試劑盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)試劑盒

Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanbreastcancersusceptibilityprotein2,BRCA-2試劑盒人癌易感蛋白2(BRCA-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織線粒體超氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分離試劑盒50次

Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISAKit人脫氫酶(SDH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

血管內皮生長因子受體2   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   規(guī)格：      英文縮寫：   VEGF-R2

血管內皮生長因子受體3   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   規(guī)格：      英文縮寫：   VEGF-R3

血管活性腸肽   英文名稱：   vasoactine inestinal peptide   規(guī)格：      英文縮寫：   VIP

內脂素/內臟脂肪素   英文名稱：   Visfatin   規(guī)格：      英文縮寫：   Visfatin

EPHA3重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

CPLX3重組人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein

EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

IL1B Protein Canine 重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

DDR2 Others Mouse 小鼠 DDR2 Kinase / CD167b 人細胞裂解液   人角膜成纖維細胞 (HcorF) SERPINF1 Others Human 人 SerpinF1 / SERPINF1 / PEDF 人細胞裂解液   NCI-H596(人肺腺鱗癌細胞) 小鼠原代腦微血管周細胞 人原代下腔靜脈外膜成纖維細胞

大鼠外周血單核原代細胞鈣結合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標簽) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。