大鼠退行性椎間盤髓核原代細胞

大鼠退行性椎間盤髓核細胞分離退行性椎間盤組織,；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質,；周圍部的纖維環(huán),，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板,，是透明軟骨復蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來,。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成,，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,，使纖維環(huán)成為堅實的組織,，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。髓核,，是乳白色半透明膠狀體,，富于彈性,，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間,。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質,。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年,，其含水量也在70%上下,。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央,，至成年時位置移至椎間盤的中后部,；在成年以前構成髓核的主要物質是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨,，隨著年齡的增長,，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少,，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代,。

產(chǎn)品名稱：大鼠退行性椎間盤髓核細胞

組織來源：椎間盤

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基,，含FBS,、EGF、Transferrin,、Selenium Solution,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠退行性椎間盤髓核細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠退行性椎間盤髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

大鼠粒細胞明膠酶關聯(lián)脂質運載蛋白(NGAL)試劑盒 ,，英文名： NGAL ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)試劑盒

MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相關因子配體(FASL)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168

B12比色法定量試劑盒20次

ELISAKitHpt/HP大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白

小鼠游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗組蛋白抗體(AHA)試劑盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人降壓素()試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8異前列腺素

異硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠0酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠轉酶/谷轉酶(ALT/GPT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

FCGR2重組小鼠 CD32 / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標簽) Protein

ADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 0.5mgADAMTS-7(a disintegrin-like and metalloprotease-7 ) 新型金屬基質蛋白酶(抗原)

SULT1A3重組人 SULT1A3 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 標簽)

CHODL Protein Rat 重組大鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (His 標簽)

DCBLD2 Others Human 人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 人細胞裂解液   ACVRL1 Others Canine 狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液   真皮成纖維細胞Many   中國倉鼠卵巢細胞-二氫還原酶缺陷型;CHO/dhFr 小鼠原代膀胱基質成纖維細胞 兔原代結膜囊成纖維細胞

大鼠退行性椎間盤髓核原代細胞內分泌腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)重組蛋白 Recombinant Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor (EG-VEGF)

CSNK1G1 Protein Human 重組人 CSNK1G1 / CKI-gamma 1 蛋白 (His & GST 標簽)

CPA2重組人 Carboxypeptidase A2 / CPA2 蛋白 Protein

NA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 酸酶 (Neuraminidase / NA) (N295S mutation) (高活性)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。