大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代表皮角化上皮細(xì)胞 A2(人腺樣囊性癌細(xì)胞) BT-20 人癌細(xì)胞 1ml/T75 L132 人肺上皮細(xì)胞 U-937 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 人原代退行性椎間盤髓核細(xì)胞

大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞,、遮光,、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐、視桿細(xì)胞層,、外界膜,、外顆粒層、外叢狀層,、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層、節(jié)細(xì)胞層,、纖維層,、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,，有感光作用,；后部鼻側(cè)有一視乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)元組成,。第一元是視細(xì)胞層,，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞,。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,，專管傳導(dǎo),。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的纖維跨越視網(wǎng)膜表面,，經(jīng)由視到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能力強(qiáng)。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力,、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,，在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義,。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細(xì)胞具有不同的特性，在腦和視網(wǎng)膜中,，這些內(nèi)皮細(xì)胞具有內(nèi)屏障的功能,，在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài),，釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用，體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機(jī)制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義,。

產(chǎn)品名稱：大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：視網(wǎng)膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)試劑盒 ,，英文名： TNFRSF5 ELISA Kit

Mouse ai endomeial aibody (EMAb) ELISA Kit 小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)試劑盒

MouseE-Cadherin,E-CadELISAKit 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumaninsulinaoaibodies,IAAELISAKit人胰島素自身抗體

微型RNA(miRNA)酶保護(hù)分析試劑盒5次

ELISAKitMIP-3α大鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3α

小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)試劑盒

Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCPELISAKit 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HeneggImmunoglobulinofYolk,IgY試劑盒雞卵黃免疫球蛋白(IgY)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞細(xì)胞壁分離試劑盒20次

mouseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠CXCR4(mouse CXCR-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠皮質(zhì)(mouse Coicosterone)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠環(huán)氧化酶-2 (mouse COX-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠結(jié)締組織生長因子(mouse CTGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

TSPAN1重組人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 標(biāo)簽) Protein

Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白 0.5mgSox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白

EFNB1重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PLAU Protein Human 重組人 Urokinase / PLAU 蛋白

CTNNB1 Others Human 人 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液   小鼠小管上皮細(xì)胞   胎兒真皮成纖維細(xì)胞Many   子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many   WI-38(人胚肺細(xì)胞)   CBRH-7919 大鼠肝癌細(xì)胞 小鼠原代脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞 兔原代小腸隱窩上皮細(xì)胞

大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (aa 1-135, His 標(biāo)簽)

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

ACNB Protein E. coli 重組大腸桿菌 acnB 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。