大鼠視乳頭星形膠質(zhì)原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：兔原代主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) BC-009 人癌細(xì)胞 1ml/T75 KM9304 EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞（彝族） RL95-2 人內(nèi)膜癌細(xì)胞 人原代外周血淋巴細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視乳頭星形膠質(zhì)采用-膠原酶聯(lián)合消化法,、結(jié)合差速貼壁制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視乳頭星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自視乳頭；視乳頭位于黃斑區(qū)鼻側(cè)附近,，境界清楚,，呈白色、圓盤狀,，因此也稱為視盤,。視網(wǎng)膜上視覺纖維在此匯集，并于此穿出眼球向視中樞傳遞,。視乳頭中央有一小凹陷區(qū),，稱為視杯或生理凹陷。視乳頭是視纖維聚合組成視的起始端,，它沒有視細(xì)胞,，因而沒有視覺，在視野中是生理盲點(diǎn),。視乳頭是開角型青光眼早受損的部位,，星形膠質(zhì)細(xì)胞是視乳頭處主要的膠質(zhì)細(xì)胞類型，可為視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞無髓鞘的軸突提供結(jié)構(gòu)和生物支持,。青光眼視病變是位不可逆性致肓眼病,。青光眼視病變以視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞軸突喪失并伴有視乳頭處細(xì)胞外基質(zhì)重坦為主要特征。導(dǎo)致視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞喪失的病理生理機(jī)制尚未闡明，膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)調(diào)控元微環(huán)境起多重作用,，越來越多的證據(jù)表明膠質(zhì)細(xì)胞町能對(duì)系統(tǒng)發(fā)育,、損傷、修復(fù)及再生起極為關(guān)鍵的作用,。視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體多扁平,，體積較大，形狀多呈不規(guī)則的多邊形,，突起較粗,，胞核為橢圓形，核仁清晰可見,，核周有較密集物質(zhì),，胞質(zhì)稀疏，骨架結(jié)構(gòu)良好,，明顯不同于長(zhǎng)梭形的成纖維細(xì)胞形態(tài),。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。