大鼠食管成纖維原代細胞公司出售的產(chǎn)品：兔原代視網(wǎng)膜色素上皮細胞 WI-38(人胚肺細胞) 293 001A 人胚細胞(Sars結(jié)構(gòu)蛋白基因修飾） 1ml/T75 HUVEC 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞 MS751 人頸表皮癌細胞 人原代胃癌組織成纖維細胞

大鼠食管成纖維原代細胞

大鼠食管成纖維細胞分離自食管組織,；食管是咽和胃之間的消化管,，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降,，而逐漸增長,。食管可分為頸段、胸段和腹段,。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi),，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中,，食管的上皮細胞增殖,，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄,，甚至一度閉鎖,，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層,、黏膜下層,、肌層和外膜。其中,，黏膜層,，包括上皮,、固有層和黏膜肌層。食管的外膜,，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,，富有血管、淋巴管及神經(jīng),。主要包含食管成纖維細胞,，成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

產(chǎn)品名稱：大鼠食管成纖維細胞

組織來源：食管

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠食管成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠食管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)試劑盒 ，英文名： TGFβ3 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 小鼠角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白

微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性比色法定量試劑盒20次

大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit,，大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit,，

抗增殖細胞核抗原(PCNA)重組蛋白 Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, Fc 標(biāo)簽)

CA9重組人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白  Protein

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL17A重組人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

兔血管生成素2試劑盒   兔血管生成素2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管生成素2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管生成素2試劑盒、兔血管生成素2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。

兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒   兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒,、兔血管內(nèi)皮細胞粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔血管內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒   兔血管內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒,、兔血管內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。

兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管緊張素Ⅱ試劑盒,、兔血管緊張素Ⅱ 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

CD80重組小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 蛋白 Protein

CD8a分子(CD8a)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 8a (CD8a)

ORM2重組人 ORM2 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

MMP9 Protein Rat 重組大鼠 MMP-9 / CLG4B 蛋白

CSSTL1 中華鱉肺來源細胞  小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL  IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   MET Others Rat 小鼠原代前列腺成纖維細胞 兔原代胸主動脈平滑肌細胞

大鼠食管成纖維原代細胞乙酰羧化酶α(ACACα)重組蛋白 Recombinant Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

MCAM重組人 CD146 / MCAM 蛋白 Protein

GST Protein Schistosoma japonicum 重組日本血吸蟲 Glutathione S-transferase / GST 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。