大鼠腎動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：兔原代肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 T-47D(人管癌細(xì)胞) HEH2 人胚胎心肌成纖維狀細(xì)胞 1ml/T75 HAN 人羊膜細(xì)胞 NCI-H209 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 人原代牙周膜干細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠腎動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腎動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織,；腎臟是機體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸、鈉離子,、鉀離子,、等，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素,、活性維生素D3、前列腺素,、激肽等,，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎動脈的分支為葉間動脈,，穿行于腎柱內(nèi),，上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處，形成與腎表面平行的弓狀動脈,。小葉間動脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管,，并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動脈，進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng),，再匯集成出球小動脈,，出腎小體,。直小動脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯合成直小靜脈,，入弓狀靜脈,、葉間靜脈，最后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎,，注入下腔靜脈,。腎動脈既是腎的營養(yǎng)血管，又是腎的機能血管,，與腎泌尿機能密切相關(guān),。腎動脈在腎實質(zhì)內(nèi)形成兩個毛細(xì)血管網(wǎng)：腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較高,，利于血漿濾過形成原尿；球后毛細(xì)血管網(wǎng),，血壓較低,，利于腎小管的重吸收。腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞是腎動脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一,，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用，②在腎小管的重吸收過程中起重要作用,，③保持凝血和纖溶的動態(tài)平衡,。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。