大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代子宮頸上皮細(xì)胞 SW480(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 2V6.11 人胚細(xì)胞 1ml/T75 GHS1 金黃地鼠皮膚成纖維細(xì)胞 HGC-27 人胃癌細(xì)胞（未分化） 人原代真皮成纖維細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)采用消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng),、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織,；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,，它是神經(jīng)元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),，在銀浸染標(biāo)本中,，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少,，呈珠狀,，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞,、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段,。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型,。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過程,，其形態(tài),、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限，因此,，其分類是相對(duì)的,。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）,。細(xì)胞呈圓形，表面光滑,，直徑約3μm,，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力,，表達(dá)GM1,、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等,。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起,，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm,，有一定的分裂增殖能力,。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,，O2A）。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體）,，故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A,。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞,。直徑約10μm,。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞,。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起,，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物，同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原,，無形成髓鞘的能力,。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side,，GC）,、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）,、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein,，MBP）等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力,。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞,，前兩者具有增殖能力。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27,、PDGF,、bFGF,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次,；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 雙極,、多極形

傳代特性 不傳代，不增殖,，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：