大鼠軟骨原代細胞

大鼠軟骨細胞分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強,，這些增生的幼稚細胞形似纖維母細胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣毎⑿纬绍浌腔|(zhì),，細胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨,、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型,。軟骨細胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布,，體積較小,，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行,，越向深層的軟骨細胞體積之間增大呈圓形,，細胞核圓形或卵圓形，染色淺,，細胞質(zhì)弱嗜堿性,，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi),，這些軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成,，稱為同源細胞群。電鏡下,，軟骨細胞有突起和皺褶,，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中,，軟骨細胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的軟骨細胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。

產(chǎn)品名稱：大鼠軟骨細胞

組織來源：軟骨組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

大鼠組織蛋白酶L(CTSL)試劑盒 ,，英文名： CTSL ELISA Kit

Mouse ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒

Mouseadrenomedullin,ADMELISAKit 小鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit人雷帕霉素靶蛋白

透射電鏡(TEM)制片處理脫水液10毫升

ELISAKitACA大鼠抗粒/中心體抗體

小鼠同型半胱酸(Hcy)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human dermatan sulfate (DS) ELISA Kit 人皮膚素(DS)試劑盒

HumanCpGoligodeoxynucleotide,CpG-ODNELISAKit 人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickehyroxine,T4試劑盒雞甲狀腺素(T4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞PP2A蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠褪黑素   英文名稱：   Mouse Melatonin   規(guī)格：      英文縮寫：   MLT

小鼠金屬硫蛋白   英文名稱：   Mouse Metallothionein   規(guī)格：      英文縮寫：   MET

小鼠尿微量白蛋白   英文名稱：   Mouse Microalbunminuria   規(guī)格：      英文縮寫：   MAU

小鼠黏膜選擇素黏附分子1   英文名稱：   Mouse Mucosal Vascular Addressin Cell Adhesion Molecule 1   規(guī)格：      英文縮寫：   MADCAM-1

CM-R070大鼠尿道上皮細胞CM-M098小鼠內(nèi)臟脂肪細胞DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / CD167 (aa 444-913) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   CALU Others Human 人 CALU / Calumenin 人細胞裂解液 小鼠原代腎上腺皮質(zhì)細胞 人原代肺微血管平滑肌細胞

CM-R078大鼠大隱靜脈平滑肌細胞IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人細胞裂解液   CCL20 Others Mouse 小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   EFNB2 Others Rat 小鼠原代腎上皮細胞 小鼠原代腹腔主動脈外膜成纖維細胞

大鼠軟骨原代細胞胎盤堿性0酸酶(ALPP)重組蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

HIST1H3A Protein Human 重組人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

KLK13重組人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

HA Protein H11N2 重組甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SEMA3A重組人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標簽) Protein