大鼠臍動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代腎足突細(xì)胞 RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) HCT-15 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 1ml/T75 BRL 大鼠肝細(xì)胞 U251 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 兔原代骨髓單核細(xì)胞

大鼠臍動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞

大鼠臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織,；它是臍動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,。臍帶是哺乳類(lèi)的連接胎兒和胎盤(pán)的管狀結(jié)構(gòu),，臍帶中通過(guò)尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動(dòng)脈及臍腸系膜靜脈,。在子宮中,，子宮動(dòng)脈在胎盤(pán)的母體部分出的毛細(xì)血管，與胎盤(pán)的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近,，在此處母體和胎兒的血液間進(jìn)行CO2和O2,，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動(dòng)脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運(yùn)送至胎盤(pán),，臍靜脈將O2和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從胎盤(pán)運(yùn)送給胎兒,。由于臍帶是分娩過(guò)程中的廢棄物，同時(shí)從臍帶中分離臍靜動(dòng)平滑肌細(xì)胞方法相對(duì)成熟,，使得體外培養(yǎng)的臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞作為研究血管的模型細(xì)胞,。臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源：臍帶

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠臍動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠臍動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

人載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒

Human tumor specific aigen (TSA) ELISA Kit 人腫瘤特異性抗原(TSA)試劑盒

HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humaninsulinaoaibodies,IAA試劑盒人胰島素自身抗體(IAA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)琥珀酰明膠法比色定量試劑盒20次

HumanLegionellaaibodyIgM，LPAb-IgMELISAKit人軍團(tuán)菌抗體IgM(LPAb-IgM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠白介素1β(IL1B)試劑盒 ,，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)試劑盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人絨毛膜β

細(xì)菌乙醇脫氫酶總活性(NDMA)比色法定量試劑盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人過(guò)氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人17-類(lèi)固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

KLK13重組人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

胎盤(pán)堿性0酸酶(ALPP)重組蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

SEMA3A重組人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HIST1H3A Protein Human 重組人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

HA Protein H11N2 重組甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人細(xì)胞裂解液   MDA-MB-468(人癌細(xì)胞)     CM-H030人外周血白細(xì)胞胰島β細(xì)胞Many   CCL3 Protein Rat 小鼠原代視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 兔原代滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞

大鼠臍動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞Gastrin(human 0.5mgGastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)

IZUMO4 Protein Human 重組人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PVRL1重組大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ACE2 Protein Mouse 重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

F7重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類(lèi),；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。