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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠膀胱成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠膀胱成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠膀胱成纖維原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 膀胱組織 |
英文名稱 | Rat Bladder Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7251 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠膀胱成纖維細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是一個(gè)儲(chǔ)尿器官,，在哺乳類動(dòng)物,，它是由平滑肌組成的一個(gè)囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi),，其后端開(kāi)口與尿道相通,。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出,。膀胱壁由三層組織組成,，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜,。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成,，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮,，可使膀胱內(nèi)壓升高,，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,，形成尿道內(nèi)括約肌,。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出,。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）,、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的膀胱成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。膀胱成纖維細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過(guò)程。近年來(lái),，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在膀胱癌發(fā)病過(guò)程中的作用,、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
山羊白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒
Rat apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒
HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 人過(guò)氧化酶(GSH-Px)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanheatshockprotein27,HSP-27試劑盒人熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒
組織輔酶Q含量比色法定量試劑盒20次
Humanmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)試劑盒
小鼠細(xì)胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human lymphocyte factor ELISA Kit 人淋巴細(xì)胞因子試劑盒
Humanα-enolaseELISAKit 人α烯醇化酶(α-enolase)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Chickeninfectiouscoryza,ic試劑盒雞傳染性鼻抗體(IC)試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞CYTOCHROMEC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物鈣調(diào)素試劑盒 植物鈣調(diào)素試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 植物鈣調(diào)素試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：植物鈣調(diào)素試劑盒,、植物鈣調(diào)素試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。
γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒,、γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月,。
植物D3試劑盒 植物D3試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 植物D3試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：植物D3試劑盒、植物D3 試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 人1,3-二0酸甘油酸試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人1,3-二0酸甘油酸試劑盒,、人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。
TFPI2重組小鼠 TFPI2 / PP5 蛋白 Protein
FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白 Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)
FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 Protein
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
ERBB2 Protein Rat 重組大鼠 HER2 / ErbB2 蛋白
CL-0343HA(人羊膜細(xì)胞) HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞) ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 IL12A & IL12B Others Human 人 IL12A & IL12B Heterodimer 小鼠原代胃成纖維細(xì)胞 兔原代食管上皮細(xì)胞
大鼠膀胱成纖維原代細(xì)胞FSH(Follicle-stimulating hormone precursor 0.5mgFSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原
AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白
CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein
SPARC Protein Mouse 重組小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CAMK2B重組人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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