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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦靜脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠腦靜脈血管平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腦靜脈組織 |
英文名稱(chēng) | Rat Brain Venous Vascular Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X7342 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞分離自腦靜脈組織,；與腦動(dòng)脈相比，腦靜脈管壁較薄,。與身體其他部位的靜脈不同,，腦靜脈管壁中沒(méi)有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴(lài)高位的勢(shì)能,。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈,；小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢，進(jìn)入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮,，最后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng),。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢，即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞,，大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流,。腦靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)試劑盒
Human ypsin (ypsin) ELISA Kit 人(ypsin)試劑盒
HumanLymeIgGELISAKit 人萊姆IgG(Lyme-IgG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanglamicaciddecarboxylase,GAD試劑盒人谷脫羧酶(GAD)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒20次
HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit人髓過(guò)氧化物酶特異性抗粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T
豬促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA 試劑盒
Human macrophage inflammatory protein 2 (MIP-2) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞性蛋白2(MIP-2)試劑盒
Porcinegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAlphaActin(HumanAlpha-Actin)ELISAKit人α肌動(dòng)蛋白
血液0酸二酯酶4(PDE4)活性熒光定量試劑盒10次
Mouseα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit小鼠α羥基脫氫酶(αHBDH)試劑盒
人著絲粒蛋白B試劑盒 人著絲粒蛋白B試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 人著絲粒蛋白B試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人著絲粒蛋白B試劑盒,、人著絲粒蛋白B 試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。
人Apelin36試劑盒 人Apelin 36試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 人Apelin 36試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人Apelin 36試劑盒,、人Apelin 36 試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月,。
雞白介素4試劑盒 雞白介素4試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 雞白介素4試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞白介素4試劑盒,、雞白介素4 試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月,。
小鼠泰澤病原體試劑盒 小鼠泰澤病原體試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 小鼠泰澤病原體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠泰澤病原體試劑盒,、小鼠泰澤病原體試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月,。
IgG1重組小鼠 IgG1-Fc 蛋白 (102 Cys/Ser) Protein
CK17(Cytokeratin 17 0.5mgCK17(Cytokeratin 17) 細(xì)胞角蛋白17抗原
SERPINB4重組人 SerpinB4 蛋白 Protein
CDKN2D Protein Human 重組人 CDKN2D / p19ink4d 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
FGF1 Protein Mouse 重組小鼠 / 大鼠 aFGF / FGF1 蛋白
CL-0271D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解液 Hep G2, 人肝癌細(xì)胞系 胰腺導(dǎo)管上皮癌細(xì)胞,PAN-1細(xì)胞 A3(淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠原代小腸平滑肌細(xì)胞 人原代食管癌細(xì)胞
大鼠腦靜脈血管平滑肌原代細(xì)胞表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)重組蛋白 Recombinant Surfactant Associated Protein J (SPJ)
CD46 Protein Human 重組人 CD46 蛋白
IgG3重組小鼠 IgG3-Fc 蛋白 Protein
EDAR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EDAR 蛋白
CARHSP1重組人 CARHSP1 蛋白 Protein
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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