大鼠卵巢微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 MCF-7(人癌細(xì)胞) RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 1ml/T75 P388D1 小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞 HCT-15 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 小鼠原代腸系膜平滑肌細(xì)胞

大鼠卵巢微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

大鼠卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化）,，呈葡萄狀,，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢,，但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu),，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官,，它的外表有一層上皮組織,，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì),。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央,，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng),。微血管又稱毛細(xì)血管,。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間,。平均直徑7-9微米,，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,，厚約0.5微米,。基膜外面有薄層結(jié)締組織,，其中有纖維細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。最細(xì)的微血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,，較粗的微血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成,。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的微血管,，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃）,，稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細(xì)胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用,。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān),。近年來血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視,。研究發(fā)現(xiàn),，不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別,，而同是微血管內(nèi)皮細(xì)胞,，它們又存在器官和組織的特異性。

產(chǎn)品名稱：大鼠卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：卵巢

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠卵巢微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠卵巢微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

兔子凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA 試劑盒

Human vasopeptidase inhibitors (VPI) ELISA Kit 人血管活性肽酶抑制劑(VPI)試劑盒

HumanAi-phosphatidylserineaibody,APSAELISAKit 人抗0脂酰絲抗體(APSA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanEpinephrine/Adrenaline,EPI試劑盒人(EPI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PRK2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanp53/tumorprotein，p53/TP53ELISAKit人P53(P53)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠干擾素γ(IFNγ)試劑盒 ,，英文名： IFNγ ELISA Kit

Human calcium binding protein (CR) ELISA Kit 人鈣結(jié)合蛋白(CR)試劑盒

rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 兔子腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBACE1(HumanBeta-siteAPP-CleavingEnzyme1)ELISAkit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1

線蟲果蠅轉(zhuǎn)座子Mos1熱休克誘導(dǎo)突變?cè)噭┖?span>10次

rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit兔子腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

LAG3重組大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 蛋白 Protein

DAPK1(Death associated protein kinase 1 0.5mgDAPK1(Death associated protein kinase 1) 凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗原

STAT1重組人 STAT1 / p91 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

INSR Protein Human 重組人 Insulin Receptor / INSR / CD220 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

BMPR1A Protein Mouse 重組小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白

CHI3L1 Others Human 人 CHI3L1 人細(xì)胞裂解液   B16(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)     ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人細(xì)胞裂解液   NCI-H838(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)   CL-0149MCF-7 小鼠原代胸腺成纖維細(xì)胞 小鼠原代鼓膜上皮干細(xì)胞

大鼠卵巢微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞CD31 (PECAM-1 0.5mgCD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(抗原)

ISG15 Protein Human 重組人 ISG15 / G1P2 蛋白

SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

SELP Protein Rat 重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CCL11重組人 CCL11 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。