大鼠口腔黏膜成纖維原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 L1210(小鼠白血病細(xì)胞) 3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 1ml/T75 NCI-H1650 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞 小鼠原代肝非實質(zhì)細(xì)胞

大鼠口腔黏膜成纖維原代細(xì)胞

大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞分離自口腔黏膜組織,；口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通,，后經(jīng)咽峽與咽相續(xù),。口腔內(nèi)有牙,、舌等器官,。口腔的前壁為唇,、側(cè)壁為頰、頂為腭,、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu),。口腔借上、下牙弓分為前外側(cè)部的口腔前庭(oral vestibule)和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔(oral cavity proper),；當(dāng)上,、下頜牙咬合時,，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通,。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

產(chǎn)品名稱：大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞

組織來源：口腔黏膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠口腔黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒

Rat angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 大鼠血管生成素1(ANG-1)試劑盒

Humaheumatoidfactor,RFELISAKit 人類風(fēng)濕因子(RF)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2試劑盒人胞漿型0脂酶A2(cPLA2)試劑盒

組織IGF-1R激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanplateletactivatingfactor，PAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)試劑盒

小鼠胃泌素(GT)試劑盒 96T/48T

Human phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 人0脂酶A2(PL-A2)試劑盒

HumanAmylaseELISAKit 人(Amylase)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenIerleukin17,IL-17試劑盒雞白介素17(IL-17)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞FSH-BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit   ELISA. 

人葡萄糖激酶(GCK)ELISAKit   ELISA. 

人單胺氧化酶(MAO)ELISAKit   ELISA.

CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

CDH2 Others Human 人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細(xì)胞裂解液   CHO(倉鼠細(xì)胞)     人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝  中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1  人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975  MFC 小鼠胃癌細(xì)胞 小鼠原代牙齦上皮細(xì)胞 人原代椎體終板軟骨細(xì)胞

大鼠口腔黏膜成纖維原代細(xì)胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3)

CDH12 Protein Human 重組人 Cadherin-12 / CDH12 蛋白

FCN1重組人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 蛋白 Protein

FABI Protein E. coli 重組大腸桿菌 Enoyl-ACP Reductase / FABI 蛋白

HA重組甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein