大鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代表皮角化細胞 Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細胞白血病細胞) 5637(HTB-9) 人膀胱癌細胞 1ml/T75 MV3 人黑色素瘤細胞 HT-29 人結(jié)腸癌細胞 小鼠原代骨骼肌成纖維細胞

大鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細胞

大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸,。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層,、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌）,，外膜（纖維膜或漿膜）,。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機體面對病原微生物的第一道防線,。因此,，腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用,。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,，在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發(fā)生,、性質(zhì)和強度,。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養(yǎng)方法,，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型,。

產(chǎn)品名稱：大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞

組織來源：結(jié)腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠結(jié)腸黏膜上皮采用先機械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠結(jié)腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)試劑盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)試劑盒 進口分裝

HumanCyclophosphamide,CTX試劑盒人環(huán)0酰胺(CTX)試劑盒

組織HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴增試劑盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰質(zhì)病毒IgG(PV-IgG)試劑盒

豬白介素3(IL-3)ELISA 試劑盒

Human ai IgE receptor aibody ELISA Kit 人抗IgE受體抗體試劑盒

Porcineiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit 豬細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALCAMELISAKit大鼠白細胞活化黏附因子

血液(UROKINASE)活性比色法定量試劑盒20次

MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISAKit小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)試劑盒

人粒細胞彈性蛋白酶(NE)試劑盒   96T/48T

人中期因子(MK)試劑盒   96T/48T

人脂氧素A4(LXA4)試劑盒   96T/48T

人脂0壁酸(LTA)試劑盒   96T/48T

ADAM15重組人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

嗅素4(OLFM4)重組蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 標簽)

CD99 Others Rat 大鼠 CD99 人細胞裂解液   HCC827(人非小細胞肺癌細胞)     CL-0364HuT 78(人T淋巴細胞白血病細胞)中國倉鼠肺細胞;R 1610 [R1610]  CL-0033BGC823(人胃癌細胞)  P815 小鼠肥大細胞癌細胞 小鼠原代胰島細胞 雞原代氣管上皮細胞

大鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細胞α1-酸性糖蛋白(α1AGP)重組蛋白 Recombinant Alpha-1-Acid Glycoprotein (a1AGP)

IL5RA Protein Human 重組人 IL5Ra / CD125 蛋白

DDC重組小鼠 DOPA Decarboxylase / DDC 蛋白 Protein

ENPP3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 ENPP3 / CD203c 蛋白

PPIL1重組人 PPIL1 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。