詳細(xì)介紹
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自脊髓組織,;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù),;是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分,。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來(lái)處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,,在椎管里面,,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對(duì)的神經(jīng),,分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),,主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成,;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓神經(jīng)纖維組成,;脊髓是許多簡(jiǎn)單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官,。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管,。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間,。平均直徑7~9微米,數(shù)量極多,,成網(wǎng)狀分布,。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米,?;ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,其中有纖維細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等,。最細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,較粗的毛細(xì)血管由2~3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成,。分布于肌肉組織,、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管,內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),,稱連續(xù)毛細(xì)血管,;分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管,,除有縫隙連接外,,細(xì)胞本身有許多小孔,(孔徑800~1000埃),,稱有孔毛細(xì)血管,;分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管,,管腔擴(kuò)大,,稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄,、通透性大,、管徑細(xì)(8~10微米)、數(shù)量多,、血流速度慢,,這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所,又稱交換血管,。血竇(sinusoid)由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成,,竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同,由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,,內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔,。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙,;肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的,,有較寬的細(xì)胞隙(0.1~0.5微米);肝,、脾血竇的基膜不完整或無(wú)基膜,,通透性比毛細(xì)血管大,較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過(guò),。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞,,脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞,這兩種細(xì)胞都有吞噬能力,,可吞噬清除血液中的異物,、細(xì)菌等有害物質(zhì),是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分,。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜,。
英文名稱 | Rat Spinal Cord Microvascular Endothelial Cells | 組織來(lái)源 | 脊髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8235 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞
組織來(lái)源:脊髓
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS,、EGF,、bFGF、IGF,、VEGF,、Heparin、Hydrocortisone,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮采用蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA 試劑盒
Rat androstene two ketone (ASD) ELISA Kit 大鼠雄(ASD)試劑盒
Humanβ2-Glycoprotein1aibodyIgA,β2-GP1AbIgAELISAKit 人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1AbIgA)試劑盒 進(jìn)口分裝
HumanCXC-chemokinereceptor1,CXCR1試劑盒人CXC趨化因子受體1(CXCR1)試劑盒
組織ERK2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
HumanprocollagenⅢN-terminalpeptide,,PⅢELISAKit人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒
小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat anaphylatoxin / compleme fragme 4a (C4a) ELISA Kit 大鼠過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)試劑盒
HumanactivatedproteinC,APCELISAKit 人活化蛋白C(APC)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Chickenniicoxide,NO試劑盒雞(NO)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞P35蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseFollistatin,FSELISAKit小鼠卵泡抑素(FS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒
Human ai SS-A/Ro aibody ELISA Kit 人抗SS-A/Ro抗體試劑盒
PorcineIerleukin1β,IL-1βELISAKit 豬白介素1β(IL-1β)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAIFELISAKit大鼠凋亡誘導(dǎo)因子
血液牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次
MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit小鼠特異生長(zhǎng)因子/相關(guān)因子(TGSF)試劑盒
NA重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標(biāo)簽) Protein
PS-1(NT 0.5mgPS-1(NT),Presennillin-1(S182) 早老素蛋白-1(抗原)
IL18RAP重組人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
AKR1C4 Protein Human 重組人 AKR1C4 蛋白 (His 標(biāo)簽)
EPCAM Protein Human 重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 HAVCR1 Others Canine 狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 CM-M088小鼠破骨細(xì)胞原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑 小鼠原代脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠原代腎周細(xì)胞
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞抑制素βE(INHβE)重組蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)
IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
IL1RAPL1重組人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein
GFP Protein Aequorea victoria 重組水母 GFP 蛋白
HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過(guò)夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。