詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠脊髓神經(jīng)元采用膠原酶&酶聯(lián)合消化法,、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠脊髓神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠脊髓神經(jīng)元原代細胞 | 組織來源 | 脊髓組織 |
英文名稱 | Rat Spinal Cord Neuron Cells | 貨號 | YS-01X7451 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
大鼠脊髓神經(jīng)元細胞分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),,位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護,;是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息,。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,,上端連接延髓,,兩旁發(fā)出成對的神經(jīng),分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細胞構(gòu)成,;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),,主要由有髓神經(jīng)纖維組成,;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官,。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞,。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),,31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,,即神經(jīng)細胞,,其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突,、軸突,。胞體又叫核周體,內(nèi)含神經(jīng)絲,、微管,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核,。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體,。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,,能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態(tài)各不相同,,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別,。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細胞,神經(jīng)元含量少,,分離純化難度大,,且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞,不能分裂增殖,,培養(yǎng)要求高,。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形,體積小,,透亮,,無突起。培養(yǎng)2-3d,,可見胞體增大,,突起增多延長;培養(yǎng)6-7d,,細胞體大飽滿,,突起明顯增加延長并交織成網(wǎng),,光暈明顯,立體感強,。培養(yǎng)20d后,死亡細胞明顯增加,,細胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,,突起粗細不均,甚至脫壁,,發(fā)生細胞崩解,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞,;屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品:
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA 試劑盒
Rat androgen (androgen) ELISA Kit 大鼠雄激素(androgen)試劑盒
Humanβ2-Glycoprotein1AibodyIgG,β2-GP1AbIgGELISAKit 人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1AbIgG)試劑盒 進口分裝
HumanCX3C-chemokinereceptor1,CX3CR1試劑盒人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)試劑盒
組織ERK1/2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit人孕同受體(PGR)試劑盒
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細胞裂解液 293(人胚細胞) 肺成纖維細胞Many 中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 人羊膜細胞 小鼠原代主動脈瓣膜間質(zhì)細胞 兔原代胎盤間充質(zhì)干細胞
人載脂蛋白B1(apo-B1)試劑盒 96T/48T
人載脂蛋白A4(apo-A4)試劑盒 96T/48T
人載脂蛋白A2(apo-A2)試劑盒 96T/48T
人載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 96T/48T
FCN1重組人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 蛋白 Protein
胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3)
HA重組甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
CDH12 Protein Human 重組人 Cadherin-12 / CDH12 蛋白
FABI Protein E. coli 重組大腸桿菌 Enoyl-ACP Reductase / FABI 蛋白
CD38 Others Cynomolgus 食蟹猴 SCARB3 人細胞裂解液 PANC-1(人胰腺癌細胞) CL-0025AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞) 原代心肌細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells 小鼠原代脂肪細胞 小鼠原代杏仁核神經(jīng)元細胞
大鼠脊髓神經(jīng)元原代細胞PBEF (CT 0.5mgPBEF (CT) 內(nèi)脂素/B細胞克隆增強因子
CGREF1 Protein Human 重組人 CGREF1 蛋白
HA重組甲型流感 H3N2 (A/California/7/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
BSG Protein Human 重組人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 (Fc 標簽)
EPHA7重組人 EphA7 / EHK3 蛋白 Protein
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,,當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。