詳細介紹
大鼠骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞)
大鼠骨髓樹突狀細胞分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,,位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,,包括細菌,、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,,稱為紅骨髓。出生時,,紅骨髓充滿全身骨髓腔,,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導(dǎo)而成的,;樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,,亦可見少量短刺狀突,,胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細胞,,貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,,多數(shù)呈懸浮生長,, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),,伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟,。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標(biāo)志,,主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細胞表面標(biāo)志,、在混合淋巴細胞反應(yīng)中能激活初始T細胞等特征進行鑒定,。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,,進而激活T淋巴細胞,,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動,、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié),;未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,,不能激活T細胞的第二信號,,可導(dǎo)致T細胞無能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,,一般在30%以下,。
英文名稱 | Rat Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 組織來源 | 骨髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8232 |
細胞形態(tài) | 圓形,樹突狀 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:大鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)
組織來源:骨髓
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形,,樹突狀
傳代特性:屬于高度分化細胞,;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,,5%
大鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡介
實驗室分離的大鼠骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導(dǎo)而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的大鼠骨髓樹突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,、細胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
1,、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒
People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脫氧尿三0酸(DP)試劑盒
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重組腺病毒效價比色法定量試劑盒50次
HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豚鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒 ,英文名: cAMP ELISA Kit
Human azidothymidine (AZT) ELISA Kit 人(AZT)試劑盒
MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 猴載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforbFGF-4(Humanbasicfibroblastgrowthfactor4)ELISAKit人堿性成纖維細胞生長因子4
細菌乳糖酵解溴百里酚藍(BTB)瓊脂平板50個
RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit兔子白介素1β(IL-1β)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬Ⅲ型膠原試劑盒 豬Ⅲ型膠原試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 豬Ⅲ型膠原試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:豬Ⅲ型膠原試劑盒,、豬Ⅲ型膠原eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。
植物B6試劑盒 植物B6試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 植物B6試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:試劑盒(進口分裝),,產(chǎn)品別名:植物B6試劑盒、植物B6eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。
植物B12試劑盒 植物B12試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 植物B12試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),,產(chǎn)品別名:植物B12試劑盒,、植物B12eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
植物激素脫落酸試劑盒 植物激素脫落酸試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 植物激素脫落酸試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:植物激素脫落酸試劑盒,、植物激素脫落酸eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。
ANGPTL4重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)
SIGLEC6重組人 SIGLEC6 / CD327 蛋白 Protein
ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL12B Protein Marmoset 重組絨猴 IL12B / IL-12B 蛋白
BxPC-3細胞,人原位胰腺腺癌細胞 人皮膚纖維微細胞系,Malmc細胞 小鼠漿細胞瘤;MPC-11 原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml Raji細胞,,Butt's 淋巴瘤細胞 卵巢癌細胞,L1細胞 羊原代肺成纖維細胞 小鼠原代骨髓肥大細胞
大鼠骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞)CD4分子(CD4)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)
IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白
CD33重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein
FAS Protein Rat 重組大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白
MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 標(biāo)簽) Protein