大鼠骨骼肌原代細胞

大鼠骨骼肌細胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種,，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附,。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢,。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官,，有豐富的血管,、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,，進行隨意運動,。肌肉可根據(jù)共形狀,、大小、位置,、起止點,、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌,、菱形肌,、三角肌、梨狀肌等,。骨骼肌細胞呈纖維狀,，不分支，有明顯橫紋,，核很多，且都位于細胞膜下方,。肌細胞內(nèi)有許多沿細胞長軸平行排列的細絲狀肌原纖維,。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺,，而暗帶染色較深,。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線,。明帶中間,，有一條較暗的線稱為Z線。兩個Z線之間的區(qū)段,，叫做一個肌節(jié),。骨骼肌細胞也稱橫紋肌細胞，細胞呈纖維狀,，不分支,，有明顯橫紋，核很多,，且都位于細胞膜下方,，細胞多呈梭行，具有一定的方向性,。骨骼肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

產(chǎn)品名稱：大鼠骨骼肌細胞

組織來源：骨骼肌組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌采用膠原酶消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠骨骼肌經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

小鼠降鈣素原(PCT)ELISA 試劑盒

People mumps virus IgG ELISA Kit 人腮腺病毒IgG 試劑盒

HumanmembraneIgD,mIgDELISAKit 人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgM試劑盒人抗巨細胞病毒抗體IgM(ai-CMVIgM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物基因組DNA化試劑盒(高多糖/酚)50次

Humanα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit人內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠泛素(Ub)試劑盒 ，英文名： Ub ELISA Kit

Human calreticulin (C) ELISA Kit 人鈣網(wǎng)蛋白(C)試劑盒

rabbitProstaglandinE1,PGE1ELISAKit 兔子前列腺素E1(PGE1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforB7-2/sCD86(HumansolubleClusterofdiffereiation86)ELISAKit人可溶性CD86

線蟲甲磺酸乙脂誘導突變試劑盒10次

RabbitB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit兔子B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠糖皮質類固醇受體試劑盒   小鼠糖皮質類固醇受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠糖皮質類固醇受體試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠糖皮質類固醇受體試劑盒,、小鼠糖皮質類固醇受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月,。

小鼠橫紋肌輔肌動蛋白試劑盒   小鼠橫紋肌輔肌動蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠橫紋肌輔肌動蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠橫紋肌輔肌動蛋白試劑盒,、小鼠橫紋肌輔肌動蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒   豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1試劑盒,、豚鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月,。

豚鼠主要組織相容性復合體試劑盒   豚鼠主要組織相容性復合體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠主要組織相容性復合體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：豚鼠主要組織相容性復合體試劑盒、豚鼠主要組織相容性復合體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月,。

ITK重組小鼠 ITK Kinase 蛋白 (aa 351-619, His & GST 標簽) Protein

簇集蛋白(CLU)重組蛋白 Recombinant Clusterin (CLU)

MBL2重組人 MBL2 / MBL / COLEC1 蛋白 Protein

IL21 Protein Human 重組人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白

CD83 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD83 蛋白 (Fc 標簽)

Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細胞)  人淋巴成纖維細胞HLF  DLD-1(人結腸腺癌細胞)     ICAM1 Others Mouse 小鼠 ICAM-1 / CD54 人細胞裂解液   恒河猴腎細胞;LLC-MK2  EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0904 羊原代呼吸道上皮細胞 豬原代鼻腔粘膜上皮細胞

大鼠骨骼肌原代細胞CK19 細胞角蛋白19多肽抗原 0.5mgCK19 細胞角蛋白19多肽抗原

AFP Protein Human 重組人 AFP / alpha-fetoprotein 蛋白 (His 標簽)

IL25重組小鼠 IL25 蛋白 (His 標簽) Protein

MME Protein Mouse 重組小鼠 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 (His 標簽)

LMAN2重組人 LMAN2 / VIP36 蛋白 (His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。