大鼠肝外膽管上皮原代細胞

大鼠肝外膽管上皮細胞分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官,，位于機體中的腹部位置,，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]鎖,、先天性膽總管囊腫,、原發(fā)性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細胞為病變的靶位,，引起膽管上皮的損傷,。了解正常膽管上皮細胞的生物學特征和病變膽管上皮細胞的病理生理學特征對研究膽管病變的發(fā)病機制、診斷和治療具有重要意義,。

產(chǎn)品名稱：大鼠肝外膽管上皮細胞

組織來源：膽管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

方法簡介

普諾賽實驗室分離的大鼠肝外膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后,，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化,，接種至預先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

普諾賽實驗室分離的大鼠肝外膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISA 試劑盒

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CLIAKitforAHA(Humanai-Histoneaibody)ELISAKit人抗組蛋白抗體

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MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit小鼠壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒

植物硝態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

土壤銨態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

土壤硝態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

植物態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

AIMP1重組小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白 Protein

凋亡相關因子(FAS)重組蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis (FAS)

KCNIP3重組人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白 Protein

IL3 Protein Human 重組人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白

LTBR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (Fc 標簽)

BABL/C2 BABL/C小鼠胚胎細胞  大鼠胰島細胞瘤細胞;INS-1 神經(jīng)上皮瘤細胞,，SK-N-MC細胞 MPC細胞,，小鼠垂體細胞  IL17A Others Human 人 IL17 / IL17A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   SELL Others Human 羊原代主動脈平滑肌細胞 大鼠原代結腸成纖維細胞

大鼠肝外膽管上皮原代細胞Connexin-45(CX45 0.5mgConnexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原)

ADSL Protein Human 重組人 ADSL / Adenylosuccinate Lyase 蛋白 (His 標簽)

CD4重組大鼠 CD4 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His 標簽)

ULBP2重組人 ULBP2 / N2DL-2 蛋白  Protein