大鼠肝動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代腦微血管周細(xì)胞 CaES-17(人食管癌細(xì)胞) SK-BR-3 人癌細(xì)胞 1ml/T75 HCT-8 人回盲腸癌細(xì)胞 GES-1-pEGFP 人胃癌綠色熒光細(xì)胞 小鼠原代視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝動(dòng)脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自肝動(dòng)脈組織,；在胚胎期，肝臟有3條動(dòng)脈供血，分別來(lái)源于胃左動(dòng)脈,、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈,，這3條動(dòng)脈分別肝臟的不同部位。出生后,，一般保留一條動(dòng)脈,，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈，由其分出左,、右肝動(dòng)脈左,、右半肝。偶爾也可見(jiàn)起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈,。但也有2條動(dòng)脈并存的情況,，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%），起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%）,，而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見(jiàn),。此外，還有5%像胚胎期一樣,，3條動(dòng)脈同時(shí)存在,。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈，如果肝臟沒(méi)有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí),，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈,，如果在常見(jiàn)肝動(dòng)脈類型外，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈肝臟的一部分血流,，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈,。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肝動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長(zhǎng)潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素,，最新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng),，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：