大鼠肝動脈平滑肌原代細胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代腦微血管周細胞 CaES-17(人食管癌細胞) SK-BR-3 人癌細胞 1ml/T75 HCT-8 人回盲腸癌細胞 GES-1-pEGFP 人胃癌綠色熒光細胞 小鼠原代視網(wǎng)膜微血管周細胞

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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠肝動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠肝動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

 

細胞簡介：

大鼠肝動脈平滑肌細胞分離自肝動脈組織,；在胚胎期，肝臟有3條動脈供血,，分別來源于胃左動脈,、腹腔動脈和腸系膜上動脈，這3條動脈分別肝臟的不同部位,。出生后,，一般保留一條動脈，大部分為起源于腹腔動脈的動脈,，由其分出左,、右肝動脈左、右半肝,。偶爾也可見起源于胃左動脈的動脈或起源于腸系膜上動脈的動脈,。但也有2條動脈并存的情況，如起源于腹腔動脈和起源于胃左動脈（25%）,，起源于腹腔動脈和起源于腸系臘上動脈（10%）,，而起源于胃左動脈和起源于腸系膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見。此外，還有5%像胚胎期一樣,，3條動脈同時存在,。這種起源于腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動脈的動脈供血時,，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈,，如果在常見肝動脈類型外，還有一支這種異位起始的動脈肝臟的一部分血流,，這種肝動脈稱副肝動脈,。肝動脈平滑肌細胞是肝動脈的重要結(jié)構(gòu)細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。肝動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關(guān)鍵因素，最新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應(yīng),，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān),。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。

公司產(chǎn)品：