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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的大鼠肺微血管平滑肌采用混合膠原酶消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的大鼠肺微血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠肺微血管平滑肌原代細胞 | 組織來源 | 肺 |
英文名稱 | Rat Pulmonary Microvascular Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X8225 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠肺微血管平滑肌細胞分離自肺組織,；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔,，左右各一,，覆蓋于心之上。肺有分葉,，左二右三,，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管,、支氣管等）與喉,、鼻相連，故稱喉為肺之門戶,，鼻為肺之外竅,。肺血管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。肺血管平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應,；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺血管平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓,；②先天性肺動脈狹窄,；③肺動脈栓塞。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關鍵因素,，最新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎癥反應,，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳2-3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
大鼠肺微血管平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA 試劑盒
Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)試劑盒
HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit 人復制蛋白A(RPA-70)試劑盒 進口分裝
Human5-Nucleotidase,5-試劑盒人5核苷酸酶(5-)試劑盒
真菌天青曙紅(Azure-eosinate)染色試劑盒50次
Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISAKit小鼠少突膠質細胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)試劑盒
豬補體蛋白3(C3)ELISA 試劑盒
Human Legionella aigen (LP Ag) ELISA Kit 人軍團菌抗原(LP Ag)試劑盒
PorcinecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforALG(Humanai-lymphocyteglobulin)ELISAKit人抗淋巴細胞球蛋白
血液卵0脂乙酰轉移酶(LCAT)活性熒光定量試劑盒20次
MouseVitaminC,VCELISAKit小鼠C(VC)試劑盒
豬α葡萄糖苷酶（α-Glu）試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
豬α干擾素(IFN-α)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
豬α干擾素(IFN-α)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
豬S-100B蛋白（S-100B）試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
HA重組甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein
PAX8(Paired box gene 8 0.5mgPAX8(Paired box gene 8) 配對盒基因8抗原
TRIB3重組人 TRIB3 / TRB3 蛋白 (GST 標簽) Protein
AFM Protein Human 重組人 AFM / Afamin 蛋白 (His 標簽)
BMPR1A Protein Human 重組人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 蛋白 (His & Fc 標簽)
ADIPOQ Protein Mouse 重組小鼠 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 標簽) 大鼠腎系膜細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆); EPO-CHO-T PC9-EGFP-puro(慢病毒構建穩(wěn)定株)人肺癌細胞 PC9-EGFP-puro 豬原代鼻腔粘膜上皮細胞 大鼠原代心肌干細胞
大鼠肺微血管平滑肌原代細胞硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)重組蛋白 Recombinant Thioredoxin Reductase 1 (TrxR1)
ACPL2 Protein Human 重組人 ACPL2 蛋白 (His 標簽)
CNDP1重組人 CNDP1 蛋白 (His 標簽) Protein
NA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Thailand/1 (KAN-1) /2004) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (His 標簽)
RAB6A重組人 Rab6 / Rab GTPases / RAB6A 蛋白 (His 標簽) Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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