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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺動(dòng)脈 |
英文名稱(chēng) | Rat Pulmonary Artery Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8224 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈亦稱(chēng)肺動(dòng)脈干,。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中,，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺動(dòng)脈起于右心室,，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行,。細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布；該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡,、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì),、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布,，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡,、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
小鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA 試劑盒
Rat basic fibroblast growth factor 6 (bFGF-6) ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)試劑盒
HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit 人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)試劑盒 進(jìn)口分裝
Human8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2α試劑盒人8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)試劑盒
正常大鼠(SpragueDawley)肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升
Mouseai-IVIgGaibodyELISAKit小鼠抗IVIgG抗體試劑盒
豬雌二醇受體(ER)ELISA 試劑盒
Human macrophage inflammatory protein 3 beta (MIP-3 beta /ELC/CCL19) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)試劑盒
PorcineOrexinB,OX-BELISAKit 豬食欲素/阿立新B(OX-B)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforALP-B(HumanBone-specificAlkphaseB)ELISAKit人骨特異性堿性0酸酶B
血液0酸二酯酶5(PDE5)活性熒光定量試劑盒10次
Mouseα-galactoyl,GalELISAKit小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)試劑盒
蔗糖合成酶（SS）試劑盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣
蔗糖0酸合成酶（SPS）試劑盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣
海藻糖含量試劑盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣
蔗糖酶試劑盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣
FABP4重組小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP / AFABP 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
過(guò)氧蛋白同源物(PXDN)重組蛋白 Recombinant Peroxidasin Homolog (PXDN)
GPHA2重組人 GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 蛋白 Protein
ADRBK1 Protein Human 重組人 GRK2 / ADRBK1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
IL22RA1 Protein Canine 重組狗 IL22RA1 / IL22R 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ACVRL1 Others Human 人 ALK-1 / ACVRL1 人細(xì)胞裂解液 小鼠心肌細(xì)胞MCM EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1 ACTE1 非洲爪蟾胚胎細(xì)胞 豬原代睪丸支持細(xì)胞 兔原代子宮平滑肌細(xì)胞
大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞Insulin protein (from porcine pancreas 0.5mgInsulin protein (from porcine pancreas) 豬胰島素
IL18 Protein Human 重組人 IL18 / Interleukin 18 / IGIF 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
ACE2重組食蟹猴 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 Protein
IL36B Protein Mouse 重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白
TLK1重組人 TLK1 / PKU-beta 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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