大鼠腸系膜上動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代骨骼肌細(xì)胞 Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 膀胱平滑肌細(xì)胞 COC1 人癌細(xì)胞 MDA-MB-231, 人癌細(xì)胞 Human 小鼠原代真皮成纖維細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡介

實驗室分離的大鼠腸系膜上動脈內(nèi)皮采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠腸系膜上動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡介：

大鼠腸系膜上動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腸系膜動脈組織,；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中最長的一段,，也是功能最重要的一段,。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段,。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的,，大腸主要濃縮食物殘渣,，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外,。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分,，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng),。腸系膜動脈由背大動脈發(fā)出的走行在腸系膜內(nèi)，分布于消化管的動脈,。分成腸系膜上動脈和腸系膜下動脈。前者主要分布于小腸左側(cè),，后者分布于結(jié)腸,、大腸、泄殖腔等處,。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞,，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁,，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口,。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至最小的微血管,。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

大鼠腸系膜上動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

公司產(chǎn)品：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。