大鼠腸成纖維原代細胞

大鼠腸成纖維細胞分離自腸道組織,；腸道指的是從胃幽門至的消化管,。腸是消化管中最長的一段,，也是功能最重要的一段,。哺乳動物的腸包括小腸,、大腸和直腸3大段,。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣,，形成糞便,，再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物,，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng),。各種哺乳動物腸的結(jié)構(gòu)和功能基本相似,。腸壁結(jié)構(gòu)一般分4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層(腹腔臟層),，平滑肌層,，黏膜下層和黏膜層。平滑肌層的外層為縱行肌纖維,，內(nèi)層為環(huán)形肌纖維,，兩者都以螺旋式走行，它們以收縮和舒張來完成腸的機械性消化,。黏膜層又分為3層：靠近黏膜下層的是一層平滑肌,，稱為黏膜肌層。其次為結(jié)締組織,，又稱為固有層,。最后面向腸腔的是一層柱狀上皮細胞構(gòu)成的黏膜。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。

產(chǎn)品名稱：大鼠腸成纖維細胞

組織來源：腸

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠腸成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠腸成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠腸成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒

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HumanαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit 人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)試劑盒 進口分裝

CLIAKitfor(Mouseai-IVIgGaibody)ELISAKit小鼠抗IVIgG抗體

飲料乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

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Human ai BP180 aibody (BP180-Ab) ELISA Kit 人抗BP180抗體(BP180-Ab)試劑盒

PorcineIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALD(Humanaldosterone)ELISAKit人固同

血液鎂離子(Mg)濃度酶反應(yīng)光譜法定量試劑盒20次

MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒

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小鼠少突膠質(zhì)細胞髓鞘糖蛋白抗體試劑盒   小鼠少突膠質(zhì)細胞髓鞘糖蛋白抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠少突膠質(zhì)細胞髓鞘糖蛋白抗體試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠少突膠質(zhì)細胞髓鞘糖蛋白抗體試劑盒,、小鼠少突膠質(zhì)細胞髓鞘糖蛋白抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

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小鼠支原體試劑盒   小鼠支原體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠支原體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠支原體試劑盒,、小鼠支原體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

IL23重組大鼠 IL-23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

CR (Calretinin 0.5mgCR (Calretinin) 鈣結(jié)合蛋白(抗原)

MME重組人 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 Protein

IL36G Protein Human 重組人 IL36G / IL1F9 蛋白

RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白 (His & Fc 標簽)

615小鼠狀肺腺癌瘤株;P615  非洲綠猴腎細胞系/IgR;VERO/IgR  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;HH-29  HL-60細胞,，早幼粒急性白血病細胞系 人T細胞淋巴瘤,Hurt-78細胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-C2  人結(jié)直腸腺癌細胞 豬原代胸腺成纖維細胞 豬原代B淋巴細胞

大鼠腸成纖維原代細胞CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7 0.5mgCHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7) 型乙酰受體α7(多肽)

IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白

SPINT2重組小鼠 HAI-2 / SPINT2 蛋白 Protein

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACVR2B 蛋白 (His & Fc 標簽)

RAC2重組人 RAC2 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。