雞卵泡顆粒原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人肺微血管平滑肌BL21-Star(DE3)pLysS 大腸桿菌小鼠支氣管上皮原代細(xì)胞BL21大腸桿菌表達(dá)菌株豬骨髓間充質(zhì)干原代細(xì)胞Blastomyces parvus大鼠支氣管上皮原代細(xì)胞Botryotinia squamosa

雞卵泡顆粒原代細(xì)胞

雞卵泡顆粒細(xì)胞分離自雞卵泡組織,；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一,，卵泡腔很大,，卵丘很明顯,。卵泡內(nèi)膜細(xì)胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細(xì)胞之間有一層基膜相隔,，內(nèi)膜細(xì)胞呈多邊形,，胞質(zhì)清亮，胞核圓形,，細(xì)胞間可見許多毛細(xì)血管,，外膜細(xì)胞位于最外層，多呈梭形,，與周圍結(jié)締組織分界不明顯,。卵泡(follicle)中卵母細(xì)胞四周有一層菱形或扁平細(xì)胞圍繞，在卵泡開始發(fā)育,、卵細(xì)胞成長的同時,，周圍的菱形細(xì)胞變?yōu)榱⒎叫危⒂蓡螌釉錾蓮?fù)層,，因其細(xì)胞漿內(nèi)含有顆粒,，故稱為顆粒細(xì)胞。初級卵泡的顆粒細(xì)胞為單層,；次級卵泡的顆粒細(xì)胞增至復(fù)層,；成熟卵泡的顆粒細(xì)胞展開又變?yōu)閱螌印ｎw粒細(xì)胞的胞核大而圓,，著色深,，細(xì)胞的游離面有許多細(xì)長突起伸入放射帶的凹陷部,。

產(chǎn)品名稱：雞卵泡顆粒細(xì)胞

組織來源：雞卵泡組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基含F(xiàn)BS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1代

消化液0.25%

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡顆粒細(xì)胞采用先機(jī)械分離后膠原酶 - 聯(lián)合消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡顆粒細(xì)胞經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。