基本信息：

產品名稱：ATPHPLC法

測試方法:HPLC法

規(guī)格 : 50管/48樣

貨號：YS-01S6574

測定意義

ATP廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中，是生物能量通貨,，能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù),。測定ATP含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài),。

測定原理：

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸,，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量，以此反應ATP含量,。

自備儀器和用品：

分光光度計/酶標儀,、水浴鍋、可調式移液槍,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽和蒸餾水。
用途范圍：僅供科研研究實驗

需自配儀器：

1、酶標儀（比色測定波長為450nm）

2,、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3,、微量移液器

實驗方法學：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg,，1克瓶裝,，每瓶140，000單位,，稱取0.1克肝素凍干粉,，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml,。取50～100μl濕潤管壁,，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固,。老鼠血易凝固,，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉,，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml,。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉,，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中,，濕潤管壁,，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉動,，每隔5～10分鐘轉動一次,，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固,。

二,、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種,。同時,，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿,。

1,、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存,。

2,、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存,。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽,、EDTA及枸櫞酸鈉,。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②,、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝,，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③,、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,，如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

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