ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下： 
     1. 正式試驗(yàn)時(shí),，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。有時(shí)本底較高,，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值而蛋白量少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入 。

詳細(xì)參考數(shù)值：
產(chǎn)品名稱：同源盒轉(zhuǎn)錄因子8抗體ELISA檢測(cè)試劑盒
英文名稱：homeobox D8 antibody
檢測(cè)范圍：1ng/mL~32ng/mL
貨號(hào)：YS-E97972
性狀：盒狀液體,。
實(shí)驗(yàn)方法：競(jìng)爭(zhēng)法,、一步法、夾心法,、高敏法等,。
作用范圍：科學(xué)研究。
樣品形式：血清血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質(zhì)期：6個(gè)月,，本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,，請(qǐng)放心購買！
庫存信息： *√質(zhì)量保證√庫存充足√
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素,；
②試劑因素,；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作,，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

注意事項(xiàng)：
1加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),，可分批次操作,，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長造成的誤差；
②加酶試劑后,，用吸水紙吸干孔外試劑,；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑,，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭,，防止交叉污染,。
2.溫育：
①如有兩種溫度,，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時(shí)間的條件,；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察,；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水??；
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直,，避免交叉污染,，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好,，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù),；
4.顯色：
ELISA試劑盒中,，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,；如以鄰苯二胺(OPD)為底物,，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,，但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。
優(yōu)點(diǎn)：
1,、*抗體----高效,、靈敏、特異
2、規(guī)范包被操作----吸附均勻,，吸附性好,，空白值低，孔底透明度高
3,、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,，可靠性強(qiáng)
4,、購買本公司的ELISA試劑盒,，免費(fèi)代測(cè)
5、技術(shù)服務(wù)要求：專業(yè),，規(guī)范,，高效
6、適用于體液,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本
7,、可檢測(cè)動(dòng)物類型豐富：人,、猴、大鼠,、小鼠,、豚鼠、地鼠,、兔,、豬、犬,、牛,、綿羊、山羊,、鵝,、雞、蝦,、河蟹,、鱸魚、斑馬魚等
8,、可檢測(cè)指標(biāo)齊全：炎癥因子,、血管生成素、動(dòng)脈粥樣硬化因子,、趨化因子,、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶、脂肪因子等等
9、經(jīng)濟(jì),、實(shí)惠,、可靠，完善,、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系,，科研隊(duì)伍，良好的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，是您可靠的合作伙伴。

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