詳細介紹
ELISA 試驗時,,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應,,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質包被適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml,。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應,,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護,。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 ,。
詳細參考數(shù)值:
產(chǎn)品名稱:角化細胞生長因子2ELISA檢測試劑盒
英文名稱:Keratinocyte Growth Factor 2
檢測范圍:25pg/mL~800pg/mL
貨號:YS-E97918
性狀:盒狀液體,。
實驗方法:競爭法、一步法,、夾心法,、高敏法等。
作用范圍:科學研究,。
樣品形式:血清血漿細胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質期:6個月,,本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,請放心購買,!
庫存信息: *√質量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素,;
②試劑因素,;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,,必能得出準確的實驗結果,,可提供免費技術咨詢服務!
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,,可分批次操作,,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,,并經(jīng)常校正其準確性,,此外,要做到一份樣本一個移液頭,,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應時間的條件,;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,,拍板時要垂直,避免交叉污染,,用力不能過猛,,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出,;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑,。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光,。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械,。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內(nèi)完成,,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm,;定量測定時用酶標儀讀取結果,,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試,。
優(yōu)點:
1,、*抗體----高效、靈敏,、特異
2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,,空白值低,,孔底透明度高
3、先進的優(yōu)化方案----重復性高,,可靠性強
4,、購買本公司的ELISA試劑盒,免費代測
5,、技術服務要求:專業(yè),,規(guī)范,高效
6,、適用于體液,、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本
7,、可檢測動物類型豐富:人、猴,、大鼠,、小鼠、豚鼠,、地鼠,、兔、豬、犬,、牛,、綿羊、山羊,、鵝,、雞、蝦,、河蟹,、鱸魚、斑馬魚等
8,、可檢測指標齊全:炎癥因子,、血管生成素、動脈粥樣硬化因子,、趨化因子,、生長因子基質金屬蛋白酶、脂肪因子等等
9,、經(jīng)濟,、實惠、可靠,,完善,、穩(wěn)定的實驗體系,科研隊伍,,先進的實驗設備,、準確可靠的實驗結果,是您可靠的合作伙伴,。
細菌內(nèi)毒素標準品(15 EU/支) 鹽酸異(I0400000 視黃醇結合蛋白(RBP)ELISA Kit
相內(nèi)毒素清除劑(100次) 鹽酸異丙腎上腺素(I0599990 視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA Kit
相內(nèi)毒素清除劑(500次) 鹽酸氧烯洛爾(O0250000 視黃酸誘導基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA Kit
終點顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒 鹽酸氧可酮 (受控(Y000092 視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA Kit
柱式腐殖酸清除劑(100次) 鹽酸土霉素(O0500000 嗜鉻蛋白A(CgA)ELISA Kit
柱式腐殖酸清除劑(30次) 鹽酸(N1279000 嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA Kit
柱式內(nèi)毒素清除劑 鹽酸氫嗎啡酮 (受控(Y0000446 嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA Kit
DNA提取相關產(chǎn)品 鹽酸羥嗪(H14 5000 嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA Kit
硅膠膜DNA離心吸附柱(大提) 鹽酸羥甲唑啉(O0290000 嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員1(EAR1)ELISA Kit
硅膠膜DNA離心吸附柱(大提)收集管(見關聯(lián)產(chǎn)品) 鹽酸萘甲唑啉(N0080000 嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA Kit
角化細胞生長因子2ELISA檢測試劑盒人 EEF1B2 基因全長ORF克隆
人 RAB4A 基因全長ORF克隆
人 RAB39A 基因全長ORF克隆
人 GRPEL1 基因全長ORF克隆
人 RIT2 基因全長ORF克隆
人 RAD1 基因全長ORF克隆
人 SDCBP2 基因全長ORF克隆
人 TRA2A 基因全長ORF克隆
人 FHL1 基因全長ORF克隆