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霍亂弧菌和群PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-03-17 21:21:15瀏覽次數(shù):236

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè) 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
產(chǎn)品名稱 霍亂弧菌和群PCR檢測(cè)試劑盒    
霍亂弧菌和群PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:馬媾疫錐蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒Trypanosoma equiperdumPCR伊氏錐蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒Trypanosoma evansiPCR猿猴錐蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒Trypanosoma simiaePCR錐蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒Trypanosoma spp.PCR

詳細(xì)介紹

12.jpg

產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),,無(wú)非特異性擴(kuò)增,;

◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝,;

◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè),;

◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒,。

服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

霍亂弧菌和群PCR檢測(cè)試劑盒


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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:

一,、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步驟

1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1(10pM)               2μl

引物2(10PM)              2μl

Taq酶(2U/μl)            1μl

DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

ddH2O至               50 μl

PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油,。

2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。

3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。

4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

三,、注意事項(xiàng)

1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行,。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。

2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響,。一般而言,,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好,。

3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套,。

4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。

5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,,試驗(yàn)一下是否滿意,,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性,。

6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),,并且要充分混勻,。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油。

2:調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min,。

3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。

4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。

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