詳細介紹
ELISA 試驗時,,注意事項如下:
1. 正式試驗時,,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,,以保證實驗結果的準確性,。有時本底較高,說明有非特異性反應,,可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,,據此判明其吸附性能是否良好,。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值而蛋白量少的濃度,。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,,應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入 。
詳細參考數值:
產品名稱:白細胞介素33受體ELISA檢測試劑盒
英文名稱:Interleukin 33 Receptor
檢測范圍:3.75pg/mL~120pg/mL
貨號:YS-E97990
性狀:盒狀液體,。
實驗方法:競爭法,、一步法、夾心法,、高敏法等,。
作用范圍:科學研究。
樣品形式:血清血漿細胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質期:6個月,,本公司試劑盒系列產品均為**批次,,請放心購買!
庫存信息: *√質量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素,;
②試劑因素,;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,,必能得出準確的實驗結果,,可提供免費技術咨詢服務!
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,,可分批次操作,,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,,并經常校正其準確性,,此外,要做到一份樣本一個移液頭,,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應時間的條件,;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時,,拍板時要垂直,,避免交叉污染,用力不能過猛,,防止抗原抗體復合物脫離,;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出,;
③為了洗滌效果好,,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,,或適當增加洗板的次數,;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,,則提供的底物為A和B兩瓶應用液,;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,,要臨用前30 min配制且必須避光,。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A,、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,,需先預熱15-30 min再進行測試。
優(yōu)點:
1,、*抗體----高效,、靈敏、特異
2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,,吸附性好,空白值低,,孔底透明度高
3,、先進的優(yōu)化方案----重復性高,可靠性強
4,、購買本公司的ELISA試劑盒,,免費代測
5、技術服務要求:專業(yè),,規(guī)范,,高效
6、適用于體液,、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本
7,、可檢測動物類型豐富:人,、猴、大鼠,、小鼠,、豚鼠、地鼠,、兔,、豬,、犬、牛,、綿羊,、山羊、鵝,、雞、蝦,、河蟹,、鱸魚、斑馬魚等
8,、可檢測指標齊全:炎癥因子,、血管生成素、動脈粥樣硬化因子,、趨化因子,、生長因子基質金屬蛋白酶、脂肪因子等等
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天凈沙鎳柱原位再生試劑盒 利多卡因(L0595000 小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA Kit
兔抗GST標簽多抗 麗春花定堿182705 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA Kit
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小鼠抗CBP標簽單抗 勞:用于系統(tǒng)適用性試驗(Y0000576 小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA Kit
小鼠抗E2標簽單抗 勞(L0750500 小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)ELISA Kit
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小鼠抗Flag標簽單抗(1000 μL) 莨菪堿 雜質E(Y0000449 小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA Kit
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