服務流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應,，無非特異性擴增,；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測,；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒,。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。

3：結束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

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實驗過程：

一,、試劑準備

1. DNA模板

2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,，而不能從無到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物,?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設計,。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二,、操作步驟

1．在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。

2．調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

三,、注意事項

１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室,。

２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響,。一般而言，只要能夠得到可靠的結果,，純化的方法越簡單越好,。

３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套,。

４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應該以大體積配制,，試驗一下是否滿意,，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性,。

６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應在冰浴上化開,，并且要充分混勻,。

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