ELISA 試驗時,，注意事項如下： 
     1. 正式試驗時,，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實驗結(jié)果的準確性,。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中,，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg／ml等）進行包被后,，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）,。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。 
     （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入 ,。

詳細參考數(shù)值：
產(chǎn)品名稱：甲氨蝶呤ELISA檢測試劑盒
英文名稱：methotrexate
檢測范圍：0.25ng/ml~8ng/ml
貨號：YS-E98442
性狀：盒狀液體。
實驗方法：競爭法,、一步法,、夾心法、高敏法等,。
作用范圍：科學(xué)研究,。
樣品形式：血清血漿細胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質(zhì)期：6個月，本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,，請放心購買,！
庫存信息： *√質(zhì)量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標本因素；
②試劑因素,；
③操作因素,。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作，必能得出準確的實驗結(jié)果,，可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù),！

注意事項：
1加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作,，以減少實驗時間延長造成的誤差,；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑,；
③作定量試驗時,，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準確性,，此外,，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染,。
2.溫育：
①如有兩種溫度,，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件,；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時,，拍板時要垂直,，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好,，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數(shù),；
4.顯色：
ELISA試劑盒中,，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,；如以鄰苯二胺(OPD)為底物,，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,，但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果,，酶標儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,，需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。
優(yōu)點：
1,、*抗體----高效,、靈敏、特異
2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,，吸附性好，空白值低,，孔底透明度高
3,、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高，可靠性強
4,、購買本公司的ELISA試劑盒,，免費代測
5、技術(shù)服務(wù)要求：專業(yè),，規(guī)范,，高效
6、適用于體液、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本
7、可檢測動物類型豐富：人,、猴,、大鼠、小鼠,、豚鼠,、地鼠、兔,、豬,、犬、牛,、綿羊,、山羊、鵝,、雞,、蝦、河蟹,、鱸魚,、斑馬魚等
8、可檢測指標齊全：炎癥因子,、血管生成素,、動脈粥樣硬化因子、趨化因子,、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶,、脂肪因子等等
9、經(jīng)濟,、實惠,、可靠，完善,、穩(wěn)定的實驗體系,，科研隊伍，良好的實驗設(shè)備,、準確可靠的實驗結(jié)果,，是您可靠的合作伙伴。

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甲氨蝶呤ELISA檢測試劑盒IFNA10 ProteinHuman重組人 Interferon alpha 10 / IFNA10 蛋白 (Fc 標簽)

contacts medium

TNF ProteinHuman重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白

HA ProteinH5N1重組甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/1194/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)

乳果糖 英文名稱：Lactulose 規(guī)格：1g 保存：-20℃,，避光

SCHAEDLER瓊脂250g用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

POSTN ProteinMouse重組小鼠 Periostin / POSTN 蛋白 (His 標簽)

EPHA7 ProteinRat重組大鼠 EphA7 / EHK3 蛋白 (His 標簽)

穿心蓮內(nèi)酯 英文名稱：Andrographolide 規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 保存：-20℃，避光

NETO1 ProteinHuman重組人 NETO1 / BTCL1 蛋白 (His 標簽)

卡那霉素B 英文名稱：Kanamycin B 規(guī)格：50mg 保存：-20℃，避光

紫草素 英文名稱：Shikonin 規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 保存：-20℃,，避光

CALM2 ProteinHuman重組人 Calmodulin 2 / CALM2 蛋白 (His 標簽)

靈芝 英文名稱：Ganoderma lucidum 規(guī)格：2g 保存：-20℃,，避光