毛癬菌通用PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：敗血梭狀芽胞桿菌PCR檢測試劑盒Clostridium septicumPCR索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒Clostridium sordelliiPCR波薩達(dá)斯球孢子菌PCR檢測試劑盒Coccidioides posadasiiPCR嗜人錐蠅PCR檢測試劑盒Cochliomyia hominivoraxPCR

服務(wù)流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng),，無非特異性擴(kuò)增,；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測,；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。

3：結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

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實(shí)驗(yàn)過程：

一,、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

三,、注意事項(xiàng)

１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室,。

２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響,。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果,，純化的方法越簡單越好,。

３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套,。

４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應(yīng)該以大體積配制,，試驗(yàn)一下是否滿意,，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,，并且要充分混勻,。

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