詳細(xì)介紹
ELISA 試驗(yàn)時,,注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時,,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。有時本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,,在其它試驗(yàn)條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入 ,。
詳細(xì)參考數(shù)值:
產(chǎn)品名稱:17α-羥化酶ELISA檢測試劑盒
英文名稱:17α-Hydroxylase
檢測范圍:62.5pg/mL~2000pg/mL
貨號:YS-E98966
性狀:盒狀液體。
實(shí)驗(yàn)方法:競爭法,、一步法,、夾心法、高敏法等,。
作用范圍:科學(xué)研究。
樣品形式:血清血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質(zhì)期:6個月,,本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,,請放心購買!
庫存信息: *√質(zhì)量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素,;
②試劑因素,;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
注意事項(xiàng):
1加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時,,可分批次操作,,以減少實(shí)驗(yàn)時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗(yàn)時,使用加樣器加注試劑,,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,,此外,要做到一份樣本一個移液頭,,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應(yīng)時間的條件,;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,,避免交叉污染,,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離,;
②洗板機(jī)洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù),;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,,定性測定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時,,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
優(yōu)點(diǎn):
1,、*抗體----高效,、靈敏、特異
2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,,吸附性好,空白值低,,孔底透明度高
3,、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強(qiáng)
4、購買本公司的ELISA試劑盒,,免費(fèi)代測
5,、技術(shù)服務(wù)要求:專業(yè),規(guī)范,,高效
6,、適用于體液、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本
7、可檢測動物類型豐富:人,、猴,、大鼠、小鼠,、豚鼠,、地鼠、兔,、豬,、犬、牛,、綿羊、山羊,、鵝,、雞、蝦,、河蟹,、鱸魚、斑馬魚等
8,、可檢測指標(biāo)齊全:炎癥因子,、血管生成素、動脈粥樣硬化因子,、趨化因子,、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶、脂肪因子等等
9,、經(jīng)濟(jì),、實(shí)惠、可靠,,完善,、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系,科研隊伍,良好的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,是您可靠的合作伙伴。
紫草(新疆紫草) 英文名稱:Gromwell (Lithospermum Xinjiang) 規(guī)格:0.5g 保存:-20℃,,避光
BBL瓊脂培養(yǎng)基250g用于雙岐桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
二氟尼柳 英文名稱:Two of diflunisal 規(guī)格:100mg 保存:-20℃,,避光
AGT ProteinHuman重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標(biāo)簽)
三油酸油酯 英文名稱:Three oleic acid glyceride 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
京尼平苷酸,;梔子酸 英文名稱:Geniposidic acid; geniposide acid 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,,避光
DDR2 ProteinCynomolgus重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CXCL12 ProteinHuman重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a)
MSLN ProteinHuman重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL5RA ProteinMouse重組小鼠 IL5Ra / CD125 蛋白 (His 標(biāo)簽)
TB培養(yǎng)基 250用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng),營養(yǎng)豐富
葒草苷 ,、葒草素 英文名稱:Orientin, orientin 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,,避光
兒茶素 英文名稱:Catechin 規(guī)格:20mg 保存:-20℃,避光
固體培養(yǎng)基250g用于細(xì)菌,、纖維分解菌,、真菌計數(shù)培養(yǎng)
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