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γ谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)微量法

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更新時間:2022-03-08 14:40:27瀏覽次數:383

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產品簡介

供貨周期 現貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號 YS-01S6396 應用領域 化工
主要用途 公司產品僅供于科研使用    
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詳細介紹

實驗方法學:

一,、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,,1克瓶裝,,每瓶140,000單位,,稱取0.1克肝素凍干粉,,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml,。取50~100μl濕潤管壁,,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固,。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些,??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml,。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水,。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),,橫向轉動,,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,,可使2~5ml血液不凝固,。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,,分成不抗凝和抗凝兩種,。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清,;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿,。

1,、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存,。

2,、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存,。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑,。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽,、EDTA及枸櫞酸鈉。

選擇抗凝的注意點:

①,、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,,充分抗凝,,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④,、抗凝收集的血漿冷凍保存后,,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定,。

基本信息:

產品名稱:γ谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)微量法

測試方法:微量法

規(guī)格 : 100管/96樣

貨號:YS-01S6396

測定意義

GCL 是 GSH 合成的限速酶,,GSH 對 GCL 有反饋抑制作用。GCL基因表達受多種因素調節(jié),,如氧化劑,、抗氧化劑、生長因子和炎癥因子等,。GCL活性高低對GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影響,。

測定原理:

ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸,;同時ATP去磷酸化產生無機磷分子,,通過測定無機磷增加速率,即可計算出GCL活性,。

自備儀器和用品:

冷凍離心機,、水浴鍋、移液器,、可見分光光度計/酶標儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。
用途范圍:僅供科研研究實驗

需自配儀器:

1,、酶標儀(比色測定波長為450nm)

2,、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)

3、微量移液器

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